[发明专利]一种单个花环样神经干细胞定向培育方法有效

专利信息
申请号: 201910098779.8 申请日: 2019-01-31
公开(公告)号: CN109735494B 公开(公告)日: 2022-06-10
发明(设计)人: 霍海芹;许争峰;胡平 申请(专利权)人: 南京市妇幼保健院
主分类号: C12N5/0797 分类号: C12N5/0797
代理公司: 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 代理人: 柏尚春
地址: 210004 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 一种单个花环样神经干细胞定向培育方法,利用人多功能干细胞消化培养获得特定小直径拟胚体,通过加入ROCK inhibitor Y‑27632与添加剂B27促进成球,经分化培养即可获得占比不少于80%的单个花环样神经干细胞。
搜索关键词: 一种 单个 花环 神经 干细胞 定向培育 方法
【主权项】:
1.一种单个花环样神经干细胞定向培育方法,其特征在于包括如下步骤:(1)在基质胶系统下,在适宜环境下选用干细胞培养液贴壁培养人多能干细胞,直至60%‑80%的密度;(2)将步骤1得到的人多能干细胞用EDTA消化,离心后,转移至培养瓶,利用移液管反复吹打以获得直径小于200µm的拟胚体,然后用神经诱导分化液悬浮培养,同时添加ROCK inhibitor Y‑27632与添加剂B27促进成球,该日记为第0天;(3)第2天,在孔板中铺设封孔膜,倒置显微镜下选取直径80‑120µm的拟胚体与液态基质胶混合滴于封孔膜上,与37℃加热至液态基质胶凝固后,加入神经诱导分化液,继续于37℃培养,第4天获得单个花环样神经干细胞。
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