[发明专利]一种提高重组人白介素-2（rhIL-2）产率的方法在审
| 申请号： | 201910069097.4 | 申请日： | 2019-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN109721652A | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 翁夏蒙 | 申请（专利权）人： | 江苏金丝利药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/55 | 分类号： | C07K14/55;C07K1/20 |
| 代理公司： | 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) 11411 | 代理人： | 黄冠华 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高重组人白介素‑2(rhIL‑2)产率的方法，包括纯化、纯化后洗脱液回收、用二巯基乙醇将rhIL‑2二聚体和错配体还原、重新氧化复性和纯化等步骤；本发明用二巯基乙醇将rhIL‑2二聚体和错配体还原，打开二硫键，重新氧化复性及纯化，使之能够形成具有生物活性的正确配对的二硫键，得到具有生物活性的rhIL‑2，使产率提高了20％左右。 | ||
| 搜索关键词： | 产率 重组人白介素 二巯基乙醇 生物活性 氧化复性 二聚体 二硫键 错配 还原 洗脱液 配对 回收 | ||
【主权项】：
1.一种提高重组人白介素‑2(rhIL‑2)产率的方法，其特征在于：包括如下步骤：(a)将纯化前的含重组人白介素‑2(rhIL‑2)及其二聚体或配错体的混合物经常规反相高效液相色谱(HPLC)纯化后得到第一组份的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物，产率为45‑46％；(b)将上述通过反相高效液相色谱(HPLC)洗脱后的重组人白介素‑2(rhIL‑2)二聚体和配错体混合物35‑45℃旋转蒸发出去洗脱剂得到第一混合物；(c)使用PBS缓冲液和SDS缓冲液将步骤(b)中的第一混合物稀释成含40‑60mmol/L PBS和质量分数0.5‑1.5％SDS的第二混合物，室温放置2‑3小时；(d)检测所述第二混合物的蛋白浓度，将所述第二混合物的蛋白浓度调节为1.5‑2mg/mL得到第三混合物；(e)向所述第三混合物内加入二巯基乙醇，使二巯基乙醇的浓度达到4‑6mmol/L，放入50‑70℃水浴中加热5‑15分钟得到第四混合物；(f)将所述第四混合物加入G‑25柱，用G‑25缓冲液洗脱、收集第一粗产物；(g)检测所述第一粗产物的蛋白浓度，使用G‑25缓冲液将所述第一粗产物的蛋白浓度调节为0.4‑0.8mg/mL得到第五混合物；(h)向所述第五混合物内加入所述第五混合物体积分数0.5‑1.5‰的浓度为50mmol/L的CuSO4，20‑40℃下氧化复性0.5‑1.5小时，反应完成后用浓度为10mmol/L的EDTA终止反应，得到第六混合物；(i)将所述第六混合物用质量分数为0.05‑0.15％的三氟乙酸(TFA)酸化后通过反相高效液相色谱(HPLC)洗脱，使用含有质量分数为0.05‑0.15％的三氟乙酸(TFA)的乙腈水溶液作为洗脱剂，收集第二产物；(j)将所述第二产物在35‑45℃旋转蒸发出去乙腈得到第二组份的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物，产率为19‑20％；(k)将所述第一组份的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物和第二组份的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物混合即得到最终的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物，总产率为64‑66％。
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