[发明专利]金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法

摘要

本发明公开了金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，属于天然蛋白提取技术领域。首先金枪鱼皮的脱脂脱杂蛋白处理；然后在乙酸溶液体系中，采用脉冲超声辅助方法加速用胃蛋白酶酶解胶原蛋白的提取过程；最后脉冲超声结束后，经离心、纯化以及干燥制得螺旋结构Ι型金枪鱼皮胶原蛋白。本发明通过脉冲超声辅助酶提加速胶原蛋白的提取过程，最终制备获得螺旋结构Ι型金枪鱼皮胶原蛋白，操作工艺简单易行，可大大提高金枪鱼皮胶原蛋白的提取率，能耗较低。

主权项

1.金枪鱼皮胶原蛋白的脉冲超声辅助酶提制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：(1)金枪鱼皮的脱脂脱杂蛋白处理：将经过4℃解冻、清洗、沥干、切碎等一系列处理的金枪鱼皮与乙醚以1:3(mg/mL)的比例浸泡脱脂72h，并更换乙醚溶剂2次，鱼皮的脂肪残留率为0.12％；将脱脂后的鱼皮与0.25M NaOH溶液以1:30(mg/mL)的比例在4℃下脱杂蛋白3h；用蒸馏水充分洗涤至中性，低温干燥，备用；(2)脉冲超声辅助酶提金枪鱼皮胶原蛋白：将步骤(1)处理后的鱼皮原料以料液比1:200(mg/mL)浸泡于0.5M乙酸溶液中，于冰浴中均质5min，进行脉冲超声处理，其中频率为28kHz，功率为100～400W，占空比为10％～90％，时间为10～50min；超声结束后加入0.06％(W/V)1800U/g的胃蛋白酶(pH＝2)，4℃酶提48h，于4℃下8000rpm离心45min，上清液即为脉冲超声辅助酶提胶原蛋白的粗提液；(3)金枪鱼皮胶原蛋白制备：将步骤(2)制得的粗提液加NaCl至0.9M盐析过夜，6000rpm离心20min，所得沉淀溶解在0.5M乙酸中，8000rpm离心45min，所得上清液加NaCl至2.4M盐析过夜，6000rpm离心20min，所得沉淀溶解在0.5M乙酸中，透析3天，真空冷冻干燥获得金枪鱼皮胶原蛋白。