[发明专利]一种青钱柳提取物及其应用

摘要

本发明为一种青钱柳提取物及其应用，首先提取、精制青钱柳提取物，吡啶经无水硫酸钠处理后于冰水浴中充分加入适量氯化酸，获得试剂A，然后再用试剂A。试剂A加入青钱柳‑无水甲酰溶液(A:青钱柳多糖，1:10，mL/mg)，在60℃夏反应120min，所得处理后的青钱柳提取物的自由基清除活性最强，同时选用小鼠巨噬细胞RAW 264.7建立体外损伤模型，可知修饰可以显著提高多糖的细胞损伤保护作用。

主权项

1.一种青钱柳提取物，其特征在于：所述提取物提取方法由以下以下步骤组成：(1)青钱柳提取物的提取与精制；(2)青钱柳提取物的修饰；所述青钱柳提取物的提取与精制包括以下步骤：A:青钱柳提取物的提取：用热水浸提法提取青钱柳提取物，称取800g干燥的青钱柳叶片粉末，按照1:10配比加入8000mL95％乙醇，浸泡过夜，除去脂质、单糖、色素小分子物质，过滤，挥干乙醇，收集残渣，在料液比1:8的条件下，将青钱柳置于80℃水浴浸提120min，浸提后过滤，收集滤液，滤渣继续水浴浸提，反复对滤渣进行2次浸提后合并所有滤液，置于旋转蒸发仪中真空浓缩后保存；B:青钱柳提取物的精制：按照体积比正丁醇：三氯甲烷＝1:5的比例配置Sevag试剂，加入浓缩液体积1/5的Sevag试剂，震荡10min，再将混合液放入离心机中离心10min，直至无蛋白沉淀，合并上清液，真空旋蒸除去有机溶剂，然后将其转入截留分子量为8000‑14000U透析袋中，依次使用自来水透析48h，蒸馏水透析24h，超纯水透析24h，透析后，使用80％乙醇反复醇沉4次，挥干乙醇，冷冻干燥即得精制的青钱柳提取物；所述青钱柳提取物修饰的步骤为：10mL吡啶经无水硫酸钠处理后，加入三颈烧瓶中置于冰水浴中充分搅拌5min，使用胶头滴管逐滴加入2mL氯化酸，并保持冰水浴不断搅拌，在60min内加完，反应完成后，移出冰水浴，恢复室温后继续搅拌50min，得试剂A，备用上述提取的冷冻干燥的青钱柳提取物100mg，充分分散于100mL无水甲酰胺中，倒入三颈烧瓶中置于冰水浴中振荡，充分搅拌5min，混均后，缓慢搅拌的同时逐步加入试剂A10mL，加入完毕，混匀后，烧瓶放置可控制温度的保温套，设置反应温度60℃，反应为100min，反应完成后，恢复至室温，采用4moL/L氢氧化钠溶液调节pH至7.0，离心，收集上清，自来水透析1d，蒸馏水透析1d，超纯水透析1d，透析后旋蒸浓缩，加95％乙醇醇沉过夜，离心，收集沉淀，加水复溶，旋蒸浓缩，冻干即得青钱柳提取物粉末。