[发明专利]一种制备谷胱甘肽合成酶系的方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，特别涉及一种从微生物细胞中制备谷胱甘肽合成酶系的方法。该谷胱甘肽合成酶系的制备方法包括：(1)将产谷胱甘肽合成酶系的微生物培养、离心收集细胞、细胞破碎；(2)配制聚丙二醇/乳酸钠双水相萃取体系溶液；(3)利用双水相萃取体系进行谷胱甘肽合成酶系的分离和纯化，得到含有谷胱甘肽合成酶系的乳酸钠溶液；(4)采用超滤膜过滤浓缩，截留液冷冻干燥，制得谷胱甘肽合成酶系产品。本发明的聚丙二醇/乳酸钠双水相体系对酶活性具有保护作用，特别适合谷胱甘肽合成酶系的分离纯化；本发明可以实现谷胱甘肽合成酶系制备的连续化、规模化，并且酶活力回收率高、纯度高，生产工艺简便，谷胱甘肽合成酶系的生产成本较低。

主权项

1.一种制备谷胱甘肽合成酶系的方法，其特征为，包括以下步骤：(1)将产谷胱甘肽合成酶系的微生物培养，得细胞培养液，离心，制得菌体细胞，将菌体细胞重悬于去离子水中，制得细胞质量百分比浓度为25～35wt％的溶液，破碎细胞，得到细胞破碎液；(2)在20～30℃下配制乳酸钠水溶液，将聚丙二醇加入到乳酸钠溶液中，在总体系中使聚丙二醇的质量百分比浓度为20～30wt％、乳酸钠的质量百分比浓度为15～25wt％，混合均匀，制得聚丙二醇/乳酸钠双水相体系溶液；(3)将步骤(1)制得的细胞破碎液与步骤(2)制得的聚丙二醇/乳酸钠双水相体系溶液按体积比(1～2)：1混合均匀，静置分相，制得乳酸钠下相溶液和含有谷胱甘肽合成酶系的聚丙二醇上相溶液；(4)向步骤(3)制得的聚丙二醇上相溶液中加入乳酸钠，使乳酸钠在总体系中的质量浓度为8～12wt％，混合均匀，静置分相，制得乳酸钠下相溶液和含有谷胱甘肽合成酶系的聚丙二醇上相溶液；(5)向步骤(4)制得的聚丙二醇上相溶液中加入乳酸钠，使乳酸钠在总体系中的质量浓度为6～10wt％，调溶液pH值为7.5～8.5，混合均匀，静置分相，制得含有谷胱甘肽合成酶系的乳酸钠下相溶液和聚丙二醇上相溶液；(6)用超滤膜对步骤(5)制得的乳酸钠溶液过滤，收集截留液，冷冻干燥，制得谷胱甘肽合成酶系产品；所述步骤(2)、(3)、(4)、(5)中的聚丙二醇的数均分子量为500。