[发明专利]一种灯盏细辛遗传转化诱导毛状根的方法在审
| 申请号： | 201810255510.1 | 申请日： | 2018-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN108441511A | 公开（公告）日： | 2018-08-24 |
| 发明（设计）人： | 黄璐琦;郭娟;赵瑜君;于一凡 | 申请（专利权）人： | 中国中医科学院中药研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/06;A01H6/14 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;张立娜 |
| 地址： | 100700 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种灯盏细辛遗传转化诱导毛状根的方法。该方法包括：采用含有目的基因表达载体的发根农杆菌的侵染液侵染灯盏细辛无菌叶盘，然后置于MS固体培养基上25±2℃暗培养2天；然后转至筛选培养基上，于25℃暗培养，每隔15～20天继代一次，直至获得灯盏细辛毛状根；进行鉴定。本发明首次以绿色荧光蛋白(GFP)作为目的基因，为进一步利用绿色荧光蛋白基因作为构建药用成分生物合成途径的报告基因提供一定的参考依据，实现了该基因在灯盏细辛毛状根遗传转化体系的高效表达，同时对外源基因在灯盏细辛毛状根生物反应器中的高效表达的可行性研究奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 灯盏细辛 毛状根 高效表达 目的基因 遗传转化 暗培养 诱导 绿色荧光蛋白基因 绿色荧光蛋白 生物合成途径 遗传转化体系 发根农杆菌 可行性研究 筛选培养基 生物反应器 报告基因 表达载体 参考依据 源基因 构建 继代 侵染 染液 无菌 叶盘 基因 | ||
【主权项】：
1.一种灯盏细辛遗传转化诱导毛状根的方法，包括如下步骤：(a1)采用含有目的基因表达载体的发根农杆菌的侵染液侵染灯盏细辛无菌叶盘，将侵染后的灯盏细辛叶盘置于MS固体培养基上，于25±2℃恒温暗培养2天；所述侵染液为用重悬液重悬所述含有目的基因表达载体的发根农杆菌所得；所述重悬液为含有终浓度为100μmol·L‑1乙酰丁香酮的MS液体培养基；(a2)将步骤(a1)培养后的灯盏细辛叶盘转至筛选培养基上，于25℃暗培养，每隔15～20天继代一次，共进行两次以上继代，直至获得灯盏细辛毛状根；进行所述继代时采用的继代培养基与所述筛选培养基均为含有抗生素的1/2MS固体培养基；所述抗生素为抗生素1和抗生素2，所述抗生素1为所述目的基因表达载体上携带的抗性筛选标记所对应的抗生素，所述抗生素2为能够抑制所述发根农杆菌生长的抗生素；所述继代培养基中的所述抗生素2的含量少于所述筛选培养基中所述抗生素2的含量，且进行后一次继代时采用的所述继代培养基中的所述抗生素2的含量均少于进行前一次继代时采用的所述继代培养基中的所述抗生素2的含量；(a3)对步骤(a2)所得灯盏细辛毛状根进行鉴定。
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