[发明专利]一种H-FABP高效检测试纸制备方法

摘要

本发明公开了一种H‑FABP高效检测试纸的制备方法，包括设在固定板上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有检测线抗体和质控线抗体；在金标垫上设有金标抗体，所述的样品垫为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为2株可互相配对形成夹心的抗人H‑FABP单克隆抗体，所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记，所述金标垫上设有功能层。本发明通过特制的含有特定功能层的金标垫，使得金标释放速度放缓，得到缓冲，从而使样本中被分析物与金标抗体的浓度比值增大，从而提高了试纸条检测的灵敏度。

主权项

1.一种H‑FABP高效检测试纸的制备方法，其特征在于，包括检测试纸，所述检测试纸包括设在固定板上依次相连的样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)；在硝酸纤维素膜(3)上设有检测线抗体(5)和质控线抗体(6)；在金标垫(2)上设有金标抗体，所述的样品垫(1)为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫(2)为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为2株可互相配对形成夹心的抗人H‑FABP单克隆抗体，所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记，所述金标垫上设有功能层；所述功能层以质量分数计由18％纯硝酸银、70％明胶、8％的司本80以及4％的环糊精组成。包括以下步骤：(1)采用“种子”生长法，以柠檬酸三钠为稳定剂和还原剂，制备出单分散的银纳米颗粒作为牺牲模板，通过置换反应获得胶体级、高分散的40nm金纳米壳；具体步骤如下：以柠檬酸三钠为稳定剂和还原剂，制备单分散的银纳米颗粒作为“种子”：在70℃的水浴下将80mL去离子水加热至恒温，加入20mL重量百分比为1％的柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀，加入1.7mL10mg/mL的AgNO3溶液，剧烈搅拌下加入2mL1％NaHB4溶液，然后持续加热和搅拌1h，室温冷却后定容至100mL；银纳米颗粒的“种子”生长：向80mL去离子水中加入2mL1％柠檬酸三钠溶液并加热到沸腾状态，然后加入一定体积的银种子溶液，在剧烈搅拌过程中，加入1.7mL10mg/mL的AgNO3溶液，继续保持搅拌和加热30min，室温冷却后定容到100mL；以银纳米颗粒为牺牲模板，通过置换反应制备胶体级、高单分散的金纳米壳：取30mL银纳米颗粒溶液，在12500g下离心20min，倒出上清液，再以去离子水定容到100mL，将此100mL的银纳米颗粒溶液加热到沸腾状态，在剧烈搅拌下加入2mMHAuCl4溶液2mL，反应液颜色逐渐由黄色转变为墨绿色，室温冷却；(2)调节纳米金壳溶液pH8.0～8.5，加入显色抗体与纳米金壳溶液反应，离心得沉淀，重悬沉淀，得金标抗体溶液；(3)将羧化纤维素膜预处理后，烘干，通过真空环境中通过红外喷涂设备分别将配制好的18％纯硝酸银、70％明胶、8％的司本80以及4％的环糊精喷涂至羧化纤维素膜好形成金标垫，然后用金标抗体溶液喷印；(4)用捕捉抗体在已活化硝酸纤维素膜上喷划检测线，真空干燥；然后用羊抗鼠IgG在已活化硝酸纤维膜上喷划质控线，真空干燥；(5)按样品垫、金标垫、硝酸纤维膜、吸收垫顺序粘贴在单面压敏胶的塑料板上，切割，装入塑料卡，包装；其中，显色抗体与捕捉抗体为2株可互相形成夹心配对的抗人H‑FABP抗体。