[发明专利]硝呋太尔胶囊的微生物限度检查方法

摘要

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种硝呋太尔胶囊的微生物限度检查方法。所述方法如下：(1)菌液制备；(2)供试液制备：取硝呋太尔胶囊供试品10g，剪碎，加50mL的十四烷酸异丙酯，震摇，再加入100mL的45℃pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液，震摇，倒入无菌带过滤网均质袋中，取滤液静置，待油水分层，取水层制成1:10的供试液；取1:10的供试液10mL，加含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液40mL，即为1:50的供试液；(3)需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定；(4)控制菌的检查。本发明解决了硝呋太尔胶囊微生物检验中的假阴性现象，患者用药安全性高。

主权项

1.一种硝呋太尔胶囊的微生物限度检查方法，其特征在于步骤如下：(1)菌液制备分别制备金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液；(2)供试液制备取硝呋太尔胶囊供试品10g，剪碎，加50mL的十四烷酸异丙酯，震摇，再加入100mL的45℃pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液，震摇，倒入无菌带过滤网均质袋中，取滤液静置，待油水分层，取水层制成1:10的供试液；取1:10的供试液10mL，加含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液40mL，即为1:50的供试液；(3)需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定①试验组：取1:50的供试液1mL，加入到含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠白胨缓冲液100mL中，经薄膜过滤法处理，用含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠白胨缓冲液分次冲洗，每膜不少于400mL，在最后一次过滤时分别加入金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，取下滤膜贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上，置30～35℃培养箱中培养3天；另外，再将加入白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液的滤膜贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，置20～25℃培养箱中培养5天；②菌液组：取pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液代替供试液，按试验组操作加入菌液，测定所加的菌液的菌数；③供试品组：取1:50的供试液，以pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液代替菌液，其他同试验组操作；胰酪大豆胨琼脂培养基置30～35℃培养箱中培养5天；沙氏葡萄糖琼脂培养基置20～25℃培养箱中培养7天；④培养后进行需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定试验组菌落数减去供试品组菌落数的值与菌液组菌落数的比值在0.5～2范围内即为合格；(4)控制菌的检查①菌液制备：制备大肠埃希菌菌悬液；②检查方法：供试品组：取1：10的供试液10mL加入到含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液100mL中，经薄膜过滤法处理，用含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液分次冲洗，每膜不少于400mL，取滤膜，置胰酪大豆胨液体培养基500mL中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定供试品组未检出大肠埃希菌；阳性对照组：取1：10的供试液10mL加入到含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液100mL中，经薄膜过滤法处理，用含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液分次冲洗，每膜不少于400mL，取滤膜，置胰酪大豆胨液体培养基500mL中，加入10～100cfu大肠埃希菌混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定阳性对照组未检出大肠埃希菌；阴性对照组：取pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液10mL置含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液100mL中，经薄膜过滤法处理，用含3％聚山梨酯80和0.3％大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液分次冲洗，每膜不少于400mL，取滤膜，置胰酪大豆胨液体培养基500mL中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定阴性对照组未检出大肠埃希菌。