[发明专利]一种遗传分析仪测试专用等位基因标准对照试剂制备方法

摘要

本发明公开了一种遗传分析仪测试专用等位基因标准对照试剂制备方法，包括：1)进行特定数量生物样本的获取；2)PCR法获得指定位点的系列等位基因；3)核心序列定点突变；4)获得指定位点全部基因克隆载体；5)设计并合成荧光引物；6)等位基因克隆载体浓度条件摸索并进行调平测试；6)多模板荧光复合扩增并检测；7)等位基因标准物扩增制备、纯化、保存。本发明采用克隆技术将特定STR位点系的列等位基因克隆进入选定克隆载体，进而通过多模板复合扩增技术对上述载体进行荧光扩增，实现等位基因标准对照试剂的可持续性制备。

主权项

1.一种遗传分析仪测试专用等位基因标准对照试剂制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1进行大量群体样本的采集，获得设定数量人群的血液或唾液样本；S2对步骤S1中采集得到的全体样本进行STR分型检测，确定每个样本的STR分型；S3根据步骤S2中得到的STR分型结果挑选包含相应分型等位基因的样本；S4等位基因克隆库的建立：在步骤S3所挑选得到的样本中，对于等位基因齐全的基因座采用直接克隆的方式获得全部等位基因的克隆，对于等位基因不全的位点采取先克隆后定点突变的方法进行等位基因克隆库的建立；S5等位基因克隆库建立后，开始荧光标准物的制备：首先设计、合成筛选出相应位点的特异性荧光引物，系列稀释所选取的质粒DNA，并进行荧光PCR扩增以摸索质粒DNA的最适浓度，之后进行模板混合调平，确定各质粒DNA的浓度后，进行多模板荧光复合PCR扩增并检测，经检验后进行纯化并分装保存。