[发明专利]用于蛋白生产和文库产生的哺乳动物细胞系在审
| 申请号： | 201780021643.6 | 申请日： | 2017-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN109072191A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | S·雷迪;W·凯尔顿;C·帕罗拉;D·梅森;M·博格森 | 申请（专利权）人： | 苏黎世联邦理工学院 |
| 主分类号： | C12N5/0781 | 分类号： | C12N5/0781;C12N15/64;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人： | 李栋修;庞东成 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | 根据本发明的第一方面，提供了产生细胞系的方法，该方法包括以下步骤：(a)提供多个哺乳动物B细胞，其中所述多个B细胞中的每一个包含编码标志物蛋白的转基因基因组DNA序列，所述标志物蛋白插入到包含在所述B细胞中的内源性免疫球蛋白基因座中，并且其中所述转基因基因组DNA序列适合于被定点核酸酶、特别是Cas9切割；(b)用编码目标蛋白的第二转基因DNA序列替换编码标志物蛋白的转基因基因组DNA序列；(c)基于标志物蛋白的存在或不存在来分选B细胞；和(d)收集其中不存在标志物蛋白的B细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 基因组DNA序列 标志物蛋白 转基因 编码标志 蛋白 内源性免疫球蛋白 哺乳动物细胞系 哺乳动物B细胞 转基因DNA序列 编码目标蛋白 蛋白生产 核酸酶 基因座 分选 文库 切割 替换 | ||
【主权项】：
1.一种用于产生细胞系的方法，其包括以下步骤：a.提供多个哺乳动物B细胞，其中所述多个B细胞中的每一个包含编码标志物蛋白的转基因基因组DNA序列，其中所述转基因基因组DNA序列插入到包含在所述B细胞中的内源性免疫球蛋白基因座，特别是IgH基因座中，并且其中所述转基因基因组DNA序列适合于被定点核酸酶、特别是CRISPR‑相关核酸内切酶(Cas9)切割；b.用编码目标蛋白的第二转基因DNA序列替换编码所述标志物蛋白的所述转基因基因组DNA序列；c.基于所述标志物蛋白的存在或不存在来分选所述B细胞；和d.收集其中不存在所述标志物蛋白的B细胞。
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