[发明专利]一种通过共振瑞利散射法准确测定壳聚糖含量的方法

摘要

本发明涉及一种通过共振瑞利散射法准确测定壳聚糖含量的方法，属于大分子物质检测领域。为了克服成品中壳聚糖的含量难以定量，操作技术繁琐的技术不足，本发明提供一种通过共振瑞利散射法准确测定壳聚糖含量的方法，该方法利用壳聚糖在弱酸性条件下与诱惑红反应生成缔合物的特性，于最大RRS波长处测量离子缔合物的RRS强度IRRS和试剂空白的RRS强度I0RRS，计算ΔIRRS＝IRRS‑I0RRS，进而建立△I与不同分子量壳聚糖浓度的标准曲线，然后根据样品中壳聚糖的分子量选择标准曲线，根据所测定的样品的ΔIRRS计算得到样品中壳聚糖的含量。本方法具有试剂廉价，灵敏度高重现性好的优点，适合在实际应用中推广使用。

主权项

1.一种通过共振瑞利散射法准确测定壳聚糖含量的方法，其包括下述步骤：1)绘制△I和不同分子量的壳聚糖浓度的标准曲线：向10ml比色管中加入B‑R缓冲液1.00ml，一定浓度梯度的低分子壳聚糖标准溶液或者样品液适量，吐温20溶液0.80ml，诱惑红溶液1.00ml，B‑R缓冲溶液1.50ml，用水稀释至刻度并摇匀，于荧光分光光度计上，以λex＝λem进行同步扫描，记录共振瑞利散射光谱，再分别于最大RRS波长处测量离子缔合物的RRS强度IRRS和试剂空白的RRS强度I0RRS，计算ΔIRRS＝IRRS‑I0RRS，建立△I与低分子壳聚糖浓度的标准曲线C1；使用中分子量壳聚糖溶液替换低分子壳聚糖溶液，建立△I与中分子壳聚糖浓度的标准曲线C2；使用高分子量壳聚糖溶液替换低分子壳聚糖溶液，建立△I与高分子壳聚糖浓度的标准曲线C3；2)10μg/mL的样品工作液的制备：称取一定量待检测样品的胶囊壳，使用冰醋酸溶解并将其定容得到样品储备液，用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液2.5mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为10μg/mL的样品工作液；3)根据壳聚糖分子量选择标准曲线：使用步骤1)中检测方法绘制△I和样品工作液的标准曲线，并将其与不同分子量的壳聚糖标准曲线比较，根据样品的△I和样品工作液的标准曲线的回归方程确定样品中的壳聚糖的分子量的大小，根据所对应的壳聚糖的分子量的大小确定所使用的回归方程；4)样品中壳聚糖含量确定：取样品工作液1mL，按步骤1)实验方法进行测定，在最大RRS波长处测定其吸光度值I，并计算ΔIRRS＝IRRS‑I0RRS，将△I代入线性回归方程求得样品中壳聚糖的含量，同时做加标回收试验。