[发明专利]一种NAD类似物偏好型氧化还原酶的筛选方法在审
| 申请号： | 201711336831.6 | 申请日： | 2017-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN109957602A | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 赵宗保;刘玉雪;王雪颖;刘武军 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/26 | 分类号： | C12Q1/26;C12N1/21;C12N1/19;C12N1/13;C12R1/19;C12R1/865;C12R1/89 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种NAD类似物偏好型氧化还原酶突变体的筛选方法。该方法中以亚磷酸敏感微生物为宿主，构建同时表达NAD类似物偏好型亚磷酸脱氢酶和NAD类似物供给功能蛋白的平台菌株；利用编码氧化还原酶突变体过表达系统的DNA样品转化平台菌株细胞，并将转化子在含有亚磷酸的环境中培养，在氧化还原酶突变体能再生NAD类似物的条件下，亚磷酸驱动亚磷酸脱氢酶突变体还原NAD类似物的同时被氧化成磷酸，菌株得以生长，所得生长正常的转化子过表达的氧化还原酶即具备偏好NAD类似物的特性。利用该方法将氧化还原酶突变体对辅因子偏好性和催化效率与细胞生长相偶联，用于高通量筛选表达NAD类似物偏好型氧化还原酶突变体菌株。 | ||
| 搜索关键词： | 类似物 氧化还原酶 亚磷酸 偏好 突变体 转化子 菌株 脱氢酶突变体 筛选 宿主 高通量筛选 敏感微生物 突变体菌株 表达系统 催化效率 功能蛋白 菌株细胞 突变体能 细胞生长 生长 辅因子 偏好性 脱氢酶 构建 磷酸 偶联 还原 驱动 再生 转化 | ||
【主权项】：
1.一种NAD类似物偏好型氧化还原酶的筛选方法，其特征在于：以亚磷酸敏感微生物为宿主，构建同时表达NAD类似物偏好型亚磷酸脱氢酶和NAD类似物供给功能蛋白的平台菌株；利用氧化还原酶突变体表达系统转化平台菌株细胞，并将转化子在含有亚磷酸的环境中培养，所得生长正常的转化子过表达的氧化还原酶即具备识别NAD类似物的特性。
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