[发明专利]一种检测hOGG1活性的生物传感器及其应用

摘要

本发明提供了一种检测8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶活性的生物传感器，包括核酸外切酶III，发卡探针和表面修饰DNA的金纳米。可采用表面增强拉曼检测8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶活性。本发明的生物传感器反应条件温和，反应速度快；其检测方法操作简便、检测周期短，检测灵敏度高；检测原理的主要过程均是在均相中实现的，提高了反应速度，降低了操作的复杂程度，实现了目标物的快速，简单，灵敏的检测；制作该生物传感器的工艺成本低。

主权项

1.一种检测8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶活性的生物传感器，其特征在于，包括核酸外切酶III，发卡探针和表面修饰DNA的金纳米；

所述发卡探针的序列如SEQ No.1所示，3’端起第二个G为8‑氧鸟嘌呤；

所述金纳米表面修饰了Walker DNA与Protect DNA杂交链，Track DNA和拉曼染料；

所述Walker DNA的序列如SEQ No.2所示，5’端修饰巯基；

所述Protect DNA的序列如SEQ No.3所示；

所述Track DNA的序列如SEQ No.4所示，5’端修饰巯基。

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，拉曼染料选自2‑硝基苯硫酚、4‑乙酰氨基苯硫酚或4‑邻巯基苯甲酸中任意一种。

3.一种如权利要求1所述的生物传感器的制备方法，包括以下步骤：

（a）分别合成发卡探针、Walker DNA、Protect DNA、Track DNA和金纳米，并配制为溶液；

（b）Walker DNA与Protect DNA杂交形成杂交链，然后在溶液中将杂交链、Track DNA和拉曼染料修饰到金纳米表面。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，Walker DNA和Protect DNA杂交的退火温度为55℃。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述拉曼染料的浓度为0.25‑3 μM。

6.一种利用如权利要求1所述的生物传感器检测8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将核酸外切酶III和发卡探针的溶液加入离心管中，然后分别加入不同8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶标准溶液和待测液，混匀，保温反应；

（2）将表面修饰的金纳米的溶液分别加入步骤（1）所得的反应液中，混匀，保温反应；

（3）用拉曼光谱仪检测步骤（2）所得反应液的SERS光谱，根据标准溶液的光谱作标准曲线后，计算待测液中8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶含量。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的反应温度为37℃，反应时间为30min。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的反应温度为37℃，反应时间为2‑2.5h。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，核酸外切酶III的浓度为10‑50 U/mL。