[发明专利]一种检测hOGG1活性的生物传感器及其应用

权利要求书

1.一种检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶活性的生物传感器，其特征在于，包括核酸外切酶III，发卡探针和表面修饰DNA的金纳米；

所述发卡探针的序列如SEQ No.1所示，3’端起第二个G为8-氧鸟嘌呤；

所述金纳米表面修饰了Walker DNA与Protect DNA杂交链，Track DNA和拉曼染料；

所述Walker DNA的序列如SEQ No.2所示，5’端修饰巯基；

所述Protect DNA的序列如SEQ No.3所示；

所述Track DNA的序列如SEQ No.4所示，5’端修饰巯基；

在发夹探针中设计鸟嘌呤氧化位点，当有目标物hOGG1存在时，hOGG1就会特异性识别并切割鸟嘌呤氧化位点，从而在发夹DNA的3’末端产生凹末端；核酸外切酶Ⅲ特异性的识别双链中3’凹末端并进行切割，从而产生序列SEQ No.5的Trigger DNA：5’-TTCATCCCAACCGACGTACTGAGAGCTAG-3’；

在通过Au-S修饰了Walker DNA和Track DNA的纳米金粒子上，并且由Protect DNA在Walker DNA末端进行保护；而Trigger DNA可以将Walker DNA末端的保护通过链置换去除，使得Walker DNA和Track DNA邻近进行杂交，从而产生核酸外切酶Ⅲ的酶切位点，将TrackDNA切除并释放Walker DNA，依次循环，就实现了Walker DNA在纳米金粒子表面行走，依次将Track DNA进行切除，使得纳米金粒子靠近团聚。

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，拉曼染料选自2-硝基苯硫酚、4-乙酰氨基苯硫酚或4-邻巯基苯甲酸中任意一种。

3.一种如权利要求1所述的生物传感器的制备方法，包括以下步骤：

（a）分别合成发卡探针、Walker DNA、Protect DNA、Track DNA和金纳米，并配制为溶液；

（b）Walker DNA与Protect DNA杂交形成杂交链，然后在溶液中将杂交链、Track DNA和拉曼染料修饰到金纳米表面。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，Walker DNA和Protect DNA杂交的退火温度为55℃。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述拉曼染料的浓度为0.25-3μM。

6.一种利用如权利要求1所述的生物传感器检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将核酸外切酶III和发卡探针的溶液加入离心管中，然后分别在不同的离心管中加入不同浓度的8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶标准溶液和待测液，混匀，保温反应；

（2）将表面修饰的金纳米的溶液分别加入步骤（1）所得的反应液中，混匀，保温反应；

（3）用拉曼光谱仪检测步骤（2）所得反应液的SERS光谱，根据标准溶液的8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶含量以及拉曼强度作标准曲线后，计算待测液中8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶含量。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的反应温度为37℃，反应时间为30min。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的反应温度为37℃，反应时间为2-2.5h。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，核酸外切酶III的浓度为10-50U/mL。