[发明专利]一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺

摘要

一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、30℃‑37℃下培养24h‑36h；将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，在温度为30℃‑37℃下进培养，作为二级培养种子液,接种到发酵罐的发酵培养基中，在30℃‑37℃下进行一级种子液培养，发酵结束后，收集二级发酵种子液,接种至发酵罐中，进行发酵培养，发酵温度30℃‑37℃，培养全程通入氮气，发酵结束后，收集罐内发酵液。优点是：将丁酸梭菌经优化菌种活化，发酵工艺优化控制，确立了稳定的产业化发酵生产工艺，发酵后可生产出发酵活菌数高，大大减少了丁酸梭菌的生产成本，适合工业规模化生产。

主权项

1.一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，其具体步骤如下：1.1培养基组成发酵培养基，1L：胰蛋白胨1％、牛肉粉膏0.3％、酵母粉0.5％、葡萄糖2％、氯化钠0.2％、乙酸钠0.2％、L‑半胱氨酸盐酸盐0.05％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.02％、碳酸钙0.05％、磷酸氢二钾0.4％、水余量；1.2菌种活化称取GAM培养基60.0g，加热溶解1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，氯化血红素2.5g，脱纤维兔血70mL，卡那霉素100mg，新霉素100mg，万古霉素1mg，混匀，得到活化液；在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、30℃‑37℃下培养24h‑36h；1.3一级种子培养将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％‑5％，在温度为30℃‑37℃、罐压为0.05Mpa‑0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min‑200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0‑6.0，发酵培养10h，作为二级培养种子液；1.4二级种子培养将制备好的二级培养种子液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％‑5％，在温度为30℃‑37℃、罐压为0.05Mpa‑0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min‑200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0‑6.0，发酵培养10h，发酵结束后，收集二级发酵种子液；1.5发酵培养将二级发酵种子液接种至发酵罐中，进行发酵培养，接种量为3％‑5％，发酵温度30℃‑37℃，罐压为0.05Mpa‑0.10Mpa，发酵罐转速为100r/min‑200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0‑6.0，发酵培养24h‑36h，发酵结束后，收集罐内发酵液,即为发酵获得丁酸梭菌菌液。