[发明专利]一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺

说明书

一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、30℃‑37℃下培养24h‑36h；将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，在温度为30℃‑37℃下进培养，作为二级培养种子液,接种到发酵罐的发酵培养基中，在30℃‑37℃下进行一级种子液培养，发酵结束后，收集二级发酵种子液,接种至发酵罐中，进行发酵培养，发酵温度30℃‑37℃，培养全程通入氮气，发酵结束后，收集罐内发酵液。优点是：将丁酸梭菌经优化菌种活化，发酵工艺优化控制，确立了稳定的产业化发酵生产工艺，发酵后可生产出发酵活菌数高，大大减少了丁酸梭菌的生产成本，适合工业规模化生产。

技术领域

本发明涉及一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺。

背景技术

丁酸梭酸(Clostridium butyricum)是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，为内生芽孢，具有很强的耐受性，能耐高温、耐酸、耐胆汁，因而通过消化道不失活，在体外室温下可保存三年以上不失效。并且对青霉素、氨苄西林、链霉素、庆大霉素、妥布霉素、氯霉素等有一定的抗性，因此这种制剂可和抗生素合用，提高疗效。大量实验证明它无任何毒副作用，被广泛用于医药、功能性保健食品和动物饲料的添加剂及植物肥料。

目前，枯草芽孢杆菌的发酵培养仍停留在实验室阶段，生产成本高，不适合工化投产。而工业化生产，普遍存在产品活菌数低，产品没有市场竞争。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，该方法发酵条件合理，成本低廉，产品活菌数搞，产品质量稳定，适合工业化生产。

本发明的技术解决方案是：

一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，其具体步骤如下：

1.1培养基组成

发酵培养基，1L：胰蛋白胨1％、牛肉粉膏0.3％、酵母粉0.5％、葡萄糖2％、氯化钠0.2％、乙酸钠0.2％、L-半胱氨酸盐酸盐0.05％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.02％、碳酸钙0.05％、磷酸氢二钾0.4％、水余量；

1.2菌种活化

称取GAM培养基60.0g，加热溶解1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，氯化血红素2.5g，脱纤维兔血70mL，卡那霉素100mg，新霉素100mg，万古霉素1mg，混匀，得到活化液；

在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、30℃-37℃下培养24h-36h；

1.3一级种子培养

将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％-5％，在温度为 30℃-37℃、罐压为0.05Mpa-0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min -200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养10h，作为二级培养种子液；

1.4二级种子培养

将制备好的二级培养种子液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％-5％，在温度为 30℃-37℃、罐压为0.05Mpa-0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min -200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养10h，发酵结束后，收集二级发酵种子液；

1.5发酵培养

将二级发酵种子液接种至发酵罐中，进行发酵培养，接种量为3％-5％，发酵温度30℃-37℃，罐压为0.05Mpa-0.10Mpa，发酵罐转速为100r/min-200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养24h-36h，发酵结束后，收集罐内发酵液。