[发明专利]一种石斛兰的组培快繁方法

摘要

本发明提供一种石斛兰的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养等步骤。其中，外植体的消毒采用酒精消毒和植物消毒液配合消毒的方式，植物消毒液的有效成分是甘草酸、柠檬汁、金银花叶提取物；各个培养阶段中所使用的培养基中添加了辣木叶汁和黄秋葵汁作为营养剂。本发明的方法对外植体的伤害小，且采用本发明提供的培养基配方可显著提高石斛兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高石斛兰组培苗的质量。

主权项

一种石斛兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，其特征在于具体步骤为：(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的石斛兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1‑2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min‑15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5‑10min，用无菌水3‑5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.10‑0.15份，柠檬汁12‑15份，金银花叶提取物0.5‑0.8份，吐温‑602‑4份，水75‑100份；(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体接种在诱导培养基内，在温度为25±1℃的条件下暗培养10‑12天，然后移至光照强度为1500LX的室内，每天光照10‑14h的培养35‑40天，得石斛兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：WPM培养基+玉米素0.5mg/L‑0.8mg/L+NAA0.2mg/L‑0.3mg/L+琼脂5.0g/L‑8.0g/L+蔗糖2.0g/L‑4.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L‑8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L‑15.0g/L，pH值5.2‑5.3；(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的石斛兰原球茎转接入继代培养基内，在温度为25±1℃，光照为1500LX，每天光照10‑14h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养75‑85天后，分化得到大量不定芽；(4)壮苗培养：将石斛兰幼株转接到壮苗培养基中，培养至根数为3‑5条，叶片3‑4片，苗高4‑8cm，即得到生根试管苗；(5)试管苗的移栽：将生根试管苗带瓶盖置于常温条件下炼苗5‑7天，打开瓶盖再炼苗2‑3天，将生根试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去基部残留的培养基，移栽于以苔藓为基质的穴盘，浇水后保持温度25±2℃，空气湿度70‑80％。