[发明专利]一种石斛兰的组培快繁方法

权利要求书

1.一种石斛兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，其特征在于具体步骤为：

(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的石斛兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.10-0.15份，柠檬汁12-15份，金银花叶提取物0.5-0.8份，吐温-602-4份，水75-100份；

(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体接种在诱导培养基内，在温度为25±1℃的条件下暗培养10-12天，然后移至光照强度为1500LX的室内，每天光照10-14h的培养35-40天，得石斛兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：WPM培养基+玉米素0.5mg/L-0.8mg/L+NAA0.2mg/L-0.3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L，pH值5.2-5.3；

(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的石斛兰原球茎转接入继代培养基内，在温度为25±1℃，光照为1500LX，每天光照10-14h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养75-85天后，分化得到大量不定芽；

(4)壮苗培养：将石斛兰幼株转接到壮苗培养基中，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到生根试管苗；

(5)试管苗的移栽：将生根试管苗带瓶盖置于常温条件下炼苗5-7天，打开瓶盖再炼苗2-3天，将生根试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去基部残留的培养基，移栽于以苔藓为基质的穴盘，浇水后保持温度25±2℃，空气湿度70-80％。

2.根据权利要求1所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述继代培养基的组成为：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.5mg/L-0.8mg/L+萘乙酸2mg/L-3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6。

3.根据权利要求1所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述壮苗培养基的组成为：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.4mg/L-0.6mg/L+萘乙酸0.5mg/L-0.6mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述金银花叶提取物的提取方法为：将新鲜金银花叶用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述辣木叶汁的制备方法是：先洗净原料，然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即辣木叶汁。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述柠檬汁是将柠檬除去表皮后，用机器搅打成汁得到的；所述黄秋葵汁是将黄秋葵表皮洗净后，用机器搅打成汁得到的。