[发明专利]一种石斛兰的组培快繁方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种石斛兰的组培快繁方法。

【背景技术】

石斛(hú)兰，是兰科植物之一，主要分布于亚洲热带和亚热带，澳大利亚和太平洋岛屿，我国大部分分布于西南、华南、台湾等地。石斛兰的主要品种有金钗石斛、密花石斛、鼓槌石斛等。可入药，名为石斛，对人体有驱解虚热，益精强阴等疗效。随着花卉产业的兴起，石斛兰也成为了一种观赏植物。石斛兰的栽培方式一般为盆栽。由于石斛兰具有秉性刚强、祥和可亲的气质，被誉为父亲之花。石斛兰的植株由肉茎构成，粗如中指，叶如竹叶花葶从叶腋抽出，每葶有花七八朵，每花6瓣，四面散开，花瓣边均为紫色，瓣心为白色。

长期以来，石斛兰以分株繁殖为主，但繁殖速度慢。想要在短时间内得到更多的植株，可以利用组织培养的方式繁殖，国内对石斛兰进行组培繁殖的报道很少。目前，也有一些学者研究了采用石斛兰嫩芽做外植体进行组织培养得到石斛兰苗的方法，但石斛兰芽尖容易染菌，且其芽尖幼嫩，对化学消毒剂敏感，容易受到伤害，导致培养过程中增殖率和分化率低；另外，由于相关的研究较少，没有找到更适合芽尖分化组织生长的培养基，导致组织培养过程中，培养周期长，培养成效不尽人意。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种石斛兰的组培快繁方法，本发明的方法对外植体的伤害小，且采用本发明提供的培养基配方可显著提高石斛兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高石斛兰组培苗的质量。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种石斛兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：

(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的石斛兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.10-0.15份，柠檬汁12-15份，金银花叶提取物0.5-0.8份，吐温-602-4份，水75-100份；

(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体接种在诱导培养基内，在温度为25±1℃的条件下暗培养10-12天，然后移至光照强度为1500LX的室内，每天光照10-14h的培养35-40天，得石斛兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：WPM培养基+玉米素0.5mg/L-0.8mg/L+NAA0.2mg/L-0.3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L，pH值5.2-5.3；

(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的石斛兰原球茎转接入继代培养基内，在温度为25±1℃，光照为1500LX，每天光照10-14h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养75-85天后，分化得到大量不定芽；

(4)壮苗培养：将石斛兰幼株转接到壮苗培养基中，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到生根试管苗；

(5)试管苗的移栽：将生根试管苗带瓶盖置于常温条件下炼苗5-7天，打开瓶盖再炼苗2-3天，将生根试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去基部残留的培养基，移栽于以苔藓为基质的穴盘，浇水后保持温度25±2℃，空气湿度70-80％。

本发明中，优选地，所述继代培养基的组成为：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.5mg/L-0.8mg/L+萘乙酸2mg/L-3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6。

本发明中，优选地，所述壮苗培养基的组成为：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.4mg/L-0.6mg/L+萘乙酸0.5mg/L-0.6mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6。

本发明中，优选地，所述金银花叶提取物的提取方法为：将新鲜金银花叶用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。