[发明专利]一种乙酰基四肽-2的液相合成方法

摘要

本发明公开了一种乙酰基四肽‑2的液相合成方法，该方法通过液相合成法合成2个N端或侧链保护小片段肽：Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑OH和H‑Val‑m‑Tyr‑OMe，再将小片段肽进行缩合后，通过酯交换完成碳端酰胺化，得到带保护的目标产物，然后脱保护得到乙酰基四肽‑2粗品，粗品经纯化后得到乙酰基四肽‑2纯品。本发明合成方法避免了固相法昂贵树脂的使用，克服了固相法每步都使用保护氨基酸、试剂用量过大的缺点，降低了成本，具有合成方法简单、节能环保等优点。

主权项

一种乙酰基四肽‑2的液相合成方法，其特征在于：采用液相合成法合成片段Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑OH和H‑Val‑m‑Tyr‑OMe，然后将这两个片段缩合，得到Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑m‑Tyr‑OMe；Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑m‑Tyr‑OMe与氨甲醇酯交换后得到Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑m‑Tyr‑NH2；Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑m‑Tyr‑NH2脱保护得到乙酰基四肽‑2粗品，粗品经纯化后得到乙酰基四肽‑2纯品；上述Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑OH的合成方法由下述步骤组成：(1)合成Ac‑D‑Lys(Boc)‑OH以二氯甲烷为溶剂，将H‑D‑Lys(Boc)‑OH、N,N′‑二异丙基乙胺、乙酸酐在室温下进行反应，反应完后分离纯化，得到Ac‑D‑Lys(Boc)‑OH；(2)合成Ac‑D‑Lys(Boc)‑COOSu以四氢呋喃为溶剂，将Ac‑D‑Lys(Boc)‑OH、N‑羟基丁二酰亚胺、二环己基碳二亚胺在室温条件下进行反应，反应完后固液分离，得到Ac‑D‑Lys(Boc)‑COOSu的四氢呋喃溶液；(3)合成Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑OH将H‑Asp(OtBu)‑OH和碳酸氢钠混合水溶液加入到步骤(2)得到的Ac‑D‑Lys(Boc)‑COOSu的四氢呋喃中，室温反应，反应完后分离纯化，得到Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑OH；上述H‑Val‑m‑Tyr‑OMe的合成方法由下述步骤组成：(1)合成Boc‑Val‑OH将H‑Val‑OH、碳酸钠溶解于纯水中，然后加入二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液，室温进行反应，反应完后分离纯化，得到Boc‑Val‑OH；(2)合成Boc‑Val‑m‑Tyr‑OMe以二氯甲烷为溶剂，将Boc‑Val‑OH、1‑羟基苯丙三唑、H‑m‑Tyr‑OMe、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N,N′‑二异丙基乙胺在室温下进行反应，反应完后分离纯化，得到Boc‑Val‑m‑Tyr‑OMe；(3)合成H‑Val‑m‑Tyr‑OMe将Boc‑Val‑m‑Tyr‑OMe加入三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，室温反应，反应完后分离纯化，得到H‑Val‑m‑Tyr‑OMe；(3)合成Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑m‑Tyr‑OMe以四氢呋喃为溶剂，将Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑OH、N‑羟基丁二酰亚胺、二环己基碳二亚胺在室温下反应4～6小时，固液分离，得到Ac‑D‑Lys‑(Boc)‑Asp(OtBu)‑COOSu的四氢呋喃溶液；将H‑Val‑m‑Tyr‑OMe与N,N′‑二异丙基乙胺依次加入到Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑COOSu的四氢呋喃溶液中，室温反应10～12小时，分离纯化产物，得到Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑m‑Tyr‑OMe。