[发明专利]一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用在审
申请号: | 201710462454.4 | 申请日: | 2017-06-19 |
公开(公告)号: | CN109134727A | 公开(公告)日: | 2019-01-04 |
发明(设计)人: | 汤瑶;王红;吴文韬;黄磊;黄笑帝 | 申请(专利权)人: | 奥为(天津)环保科技有限公司 |
主分类号: | C08F122/38 | 分类号: | C08F122/38;C08F2/38;C08F4/30;G01N1/30 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 300350 天*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | 本发明提供了一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用,属分子生物学领域。该变性凝胶由40%甲叉双丙烯酰胺和去离子甲酰胺在催化剂过硫酸铵、加速剂四甲基乙二胺以及变性剂尿素作用下聚合而成。变性凝胶电泳所用样品为200 bp左右的PCR扩增片段,凝胶浓度为8%,凝胶变性范围为32%‑56%,过硫酸铵与四甲基乙二胺用量分别为90‑110μL、18‑25μL,电泳条件为60℃、60 V、16h。本发明能够提高凝胶质量和制作的稳定性,及确保实验精度的可靠性,对200 bp左右的PCR产物具有非常好的分离效果。 | ||
搜索关键词: | 变性凝胶 四甲基乙二胺 聚丙烯酰胺 过硫酸铵 凝胶 制作 分子生物学领域 甲叉双丙烯酰胺 变性凝胶电泳 电泳条件 分离效果 尿素作用 凝胶变性 变性剂 加速剂 甲酰胺 催化剂 聚合 离子 应用 | ||
【主权项】:
1.一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用,其特征步骤为:(1)利用通用引物SP2(其正向链F357‑GC‑clamp为5'‑CGC CCG CCG CGC CCC GCG CCC GGC CCG CCG CCCCCG CCC CCC TAC GGG AGG CAG CAG‑3'和反向链R518为5'‑ATT ACC GCG GCT GCT GG‑3')扩增细菌16S rDNA V3区;(2)由4.8 mL 100%凝胶母液和10.2 mL 0%凝胶母液配制32%变性胶溶液,由8.4 mL 100%凝胶母液和6.6 mL 0%凝胶母液配制56%变性胶溶液;(3)向变性胶溶液中依次加入100 μL过硫酸铵(APS)和18 μL四甲基乙二胺(TEMED),摇匀,4 min内匀速完成灌胶,避光放置8h‑10 h。
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