本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶及其多克隆抗体。双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶的多克隆抗体的制备方法，包括步骤：1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；2)纯化抗血清得到双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶的多克隆抗体。本发明利用PCR技术在喜冷杆菌属Cryobacterium中扩增得到双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶基因，并通过基因工程技术得到Ecoli BL21‑pET21a‑BMTHC重组菌株，诱导表达重组菌株得到双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶蛋白，该蛋白具有较好的低温耐受，而且以双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶为抗原成功得到双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶的多克隆抗体。
本发明公开了一种双功能酶、双功能酶突变体及其应用。该双功能酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，该双功能酶由CKI酶和CCT酶通过连接肽连接组成，CKI酶的蛋白序列如SEQ ID NO:2所示，CCT酶的蛋白序列如SEQ ID NO:3所示，连接肽的氨基酸序列如本发明具有如下有益效果：(1)双功能酶或突变体可替代CKI酶和CCT酶，使两步反应合为一步反应，由于中间产物及终产物对其反馈抑制低，该酶活性更高，为两种酶的活性的160％以上，更加适用于体外酶促反应。(2)使用双功能酶进行酶促反应，仅需在反应体系中加入单一酶，降低了酶的生产成本。(3)在反应体系中无需考虑酶的配比，使催化流程更加简单且重复性更佳。
本发明公开了一种具有降解葡聚糖和壳聚糖的双功能酶、基因及应用，该双功能酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该双功能酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用宏基因组测序数据筛选出了一种新的水解纤维素及多糖复合物的酶基因，为挖掘微生物中酶基因资源提供了一种新思路。因该双功能酶可高效降解葡聚糖和壳聚糖，因此，该双功能酶在动物饲料、畜禽养殖等领域有更广泛的应用前景。
本发明公开了一种高效全降解聚己内酯的方法，在聚己内酯降解中使用双功能融合酶进行降解，所述的双功能融合酶为含脂肪酶和角质酶活性的双功能融合酶Lip‑Cut，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的方法，所使用的双功能酶是基于角质酶和脂肪酶在水解机制上互补性而工程化构建获得，可以温和条件下协同作用发挥二种酶的催化性能，快速降解彻底PCL为6‑羟基己酸单体，便于回收再利用，在PCL降解和资源再生中具有良好的应用前景
本发明属生物工程领域，涉及一种新型β葡萄糖苷酶/木糖苷酶双功能纤维素降解酶RuBGX2及其编码基因与应用。RuBGX2的氨基酸编码序列包含SEQ ID NO 2序列第18-755位。RuBGX2来源于中国牦牛瘤胃微生物，通过对瘤胃宏基因组cosmid文库和亚克隆文库的功能筛选、测序分析获得编码一种新型β葡萄糖苷酶/木糖苷酶双功能纤维素降解酶RuBGX2的新基因。本发明的β葡萄糖苷酶/木糖苷酶双功能酶可广泛应用于纤维素的降解，包括纤维素生物转化、化工、纺织、食品、生物能源、饲料添加、医药工业方面应用等领域。利用本发明的RuBGX2双功能酶降解木质纤维，能够减少添加酶的种类，简化酶解工艺。
本发明公开了一种具有蜡酯合成活性和甘油三酯合成活性的双功能酶及其编码基因与应用，涉及生物技术领域。本发明公开的具有蜡酯合成活性和甘油三酯合成活性的双功能酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示。本发明的研究显示SEQ ID NO:1所示的双功能酶(TrWSD4)和SEQ ID NO:3所示的双功能酶(TrWSD5)均是一种新的兼具蜡酯合成酶和甘油三酯合成酶活性的酶，这两种酶均能合成蜡酯和/或甘油三酯
本发明涉及双功能萜合酶及其突变体以及催化产物5‑15环系二倍半萜类化合物。双功能萜合酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，双功能萜合酶突变体是将SEQ IDNO.1所示氨基酸序列的第89位置的丝氨酸(Serine)突变为亮氨酸(Leucine)后获得的如SEQ ID NO与现有技术相比，本发明通过双功能萜合酶高效精简突变库的构建和突变产物的检测，改造了双功能萜合酶的催化功能，获得了具丰富环系结构的萜类化合物，对有效扩充萜类天然产物库，增添更多具潜在药物价值萜类化合物后备军具有重要意义
