[发明专利]一种用于无创产前检测的文库构建方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种用于无创产前检测的文库构建方法及试剂盒。本发明的方法包括：在同一反应体系中，在dNTP和额外dATP存在下，利用聚合酶、多聚核苷酸激酶和不具有3’‑5’外切活性的聚合酶对片段化DNA进行末端修复与加A；然后进行加接头以及纯化、PCR和环化。本发明的方法，大大缩短建库时间，提升高通量建库技术应用到无创产前检测等医学临床检测项目的实效，并且降低起始DNA在建库过程的损耗，降低PCR扩增的循环数，从而提高可用数据比率，降低数据碱基偏向性，并且能实现无需PCR的建库。可以广泛实现不同类型微量起始DNA的快速建库，并且可以应用于BGISEQ、illumina等多种测序平台。

主权项

1.一种用于无创产前检测的文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：在同一反应体系中，在dNTP存在下，利用聚合酶将片段化DNA的末端补平或切平，利用多聚核苷酸激酶将5’羟基转变成5’磷酸基团且将3’磷酸基团转变成3’羟基；在过量dATP存在下，利用不具有3’-5’外切活性的聚合酶在双链DNA 3’末端加上dATP；在所述反应体系中，直接加入鼓泡型接头和连接反应混合液，使上一步产生的3’A突出的双链DNA与所述接头连接；纯化上一步接头连接的产物后，加入与所述接头序列两端互补的核酸单链作为引物进行PCR扩增，其中一条引物5’末端有磷酸化修饰，得到大量双链DNA，其中一条链的5’端有磷酸基团；纯化上一步PCR扩增的产物后，利用热变性将所述双链DNA变成单链脱氧核酸，并加入一段与接头首尾序列互补的单链核酸作为介导桥序列，与变性后的单链脱氧核酸杂交及连接反应，使目的单链核酸环化，得到所述文库。