[发明专利]转基因甘蔗白糖DNA的富集方法及转基因甘蔗白糖的鉴定方法有效
| 申请号： | 201710152159.9 | 申请日： | 2017-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN106987584B | 公开（公告）日： | 2020-04-07 |
| 发明（设计）人： | 王文治;杨本鹏;张树珍;冯小艳;冯翠莲;王俊刚;蔡文伟;熊国如;赵婷婷;沈林波;武媛丽 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/686;C12Q1/6895;C12N15/11 |
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| 地址： | 571101 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种转基因甘蔗白糖DNA的富集方法及转基因甘蔗白糖的鉴定方法。本发明通过2‑3次简单的水溶解‑氯仿抽提‑异丙醇沉淀并实现残留DNA富集的过程，同时达到彻底去除糖分的目的，再通过DNA纯化或提取试剂盒进一步进行纯化并去除短片段DNA碎片，操作简单，成本低，能稳定的从甘蔗白糖中提取到高质量的DNA模板用于RT‑PCR检测。同时针对白糖中所残留DNA降解严重，片段短的特点，设计了一系列扩增短片段的内源和外源基因的引物，筛选到了扩增效果极佳的特异性引物，进行检测，能稳定灵敏的辨别转基因甘蔗白糖与非转基因甘蔗白糖。 | ||
| 搜索关键词： | 转基因 甘蔗 白糖 dna 富集 方法 鉴定 | ||
【主权项】：
一种富集甘蔗白糖DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，取白糖；S2，加入ddH2O，溶解；S3，加入体积比为24︰1的氯仿/异戊醇混合溶液，摇晃震荡均匀后，离心，取上清液；S4，加入0.05‑0.2体积的3M的NaAc；S5，加入0.8‑1.2体积的异丙醇，‑15℃以下沉淀30‑60min，离心，取沉淀；S6，重复2～3次步骤S2～S5；S7，沉淀用65～85％的乙醇洗涤，干燥即得。
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