[发明专利]一种卵黄免疫球蛋白的提取方法

摘要

一种卵黄免疫球蛋白的提取方法，包括原料处理、除脂、絮凝沉淀、过滤浓缩、盐析、离子交换层析纯化、微滤和干燥，得IgY冻干粉。本发明方法操作简便，结合了低温絮凝沉淀、超滤、盐析沉淀和离子交换层析技术手段提高了卵黄免疫球蛋白的纯度，整个过程无有机溶剂参与，产品安全性高，而且产生的副产品蛋清粉和蛋黄粉也可以应用于食品领域，提高了资源利用率。

主权项

一种卵黄免疫球蛋白的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）原料处理：取新鲜鸡蛋，纯水浸泡25~30min后，用次氯酸钠消毒液消毒，再用纯水去除残留消毒液，沥干备用；（2）除脂：取经步骤（1）处理得到的鸡蛋，分离卵清和卵黄，去除卵黄膜，得卵黄液，按重量比卵黄液：超纯水=1:7~15向卵黄液中加入0~4℃的超纯水，混匀，得卵黄稀释液；卵黄稀释液用食品酸度调节剂调pH至5.0~7.0，搅拌30~40min，于0~4℃静置8~15h后，0~4℃以6000~8000rpm离心35~40min，得沉淀物和上清液，取上清液备用；取蛋清和离心得到的沉淀物，分别经喷雾干燥，得蛋清粉和蛋黄粉；（3）絮凝沉淀：在冰水浴条件下，向步骤（2）得到的上清液中边搅拌边依次加入质量浓度为0.8~1.5%的海藻酸钠水溶液和质量浓度为17~22%的氯化钙水溶液，其中，海藻酸钠水溶液的添加量为所述上清液体积的0.6~0.9%，氯化钙水溶液的添加量为所述上清液体积的0.24~0.32%，再用食品酸度调节剂调pH至4.5~8.5，搅拌30~50min，静置0.5~1h以产生絮凝，得絮凝液；（4）过滤浓缩：用板框过滤器除去絮凝液中的絮凝物，过滤压力控制在0.6~0.8MPa，得粗滤液；粗滤液采用超滤膜进行过滤浓缩，得浓缩截留液；其中，超滤膜的截留分子量为30~100KD，超滤温度5~15℃，操作压力0.1~0.3MPa，超滤膜选自醋酸纤维素膜、聚醚砜膜、改性聚砜膜或聚偏氟乙烯膜；（5）盐析：向浓缩截留液中加入其3~5倍体积的16%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得一次上清液；向一次上清液中加入其3~5倍体积的37%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得二次上清液；向二次上清液中加入其3~5倍体积的40%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得三次上清液；向三次上清液中加入其3~5倍体积的50%饱和盐析盐溶液，低温离心弃上清液，收集沉淀，即得卵黄免疫球蛋白粗提物；或向浓缩截留液中加入其3~5倍体积的33%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得一次上清液；向一次上清液中加入其3~5倍体积的33%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得二次上清液；向二次上清液中加入其3~5倍体积的50%饱和盐析盐溶液，低温离心弃上清液，收集沉淀，即得卵黄免疫球蛋白粗提物；所述的低温离心条件为：0~4℃以8000~12000rpm离心10~15min；（6）纯化：采用离子交换层析法对卵黄免疫球蛋白粗提物进行纯化，得纯化后的卵黄免疫球蛋白溶液；（7）微滤、干燥：用微滤膜孔径大小为0.22μm的微滤器对经步骤（6）处理得到的卵黄免疫球蛋白溶液进行过滤除菌，冷冻干燥，得IgY冻干粉。