[发明专利]一种卵黄免疫球蛋白的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制品及分离技术领域，具体涉及一种卵黄免疫球蛋白的提取方法。

背景技术

在免疫学领域把由鸡卵黄中获得的抗体称为卵黄免疫球蛋白（Immunoglobulin of Yolk，IgY），是产蛋母鸡受免疫刺激后产生免疫反应，在输卵管内卵黄成熟期血液中的IgG被选择性地转移到卵黄中唯一的免疫球蛋白类物质，主要应用于疾病的诊断检测和防治、兽医临床、食品添加剂及化妆品领域等。

目前，从鸡卵黄中分离纯化IgY的主要方法包括：（1）通过水稀释法、有机溶剂抽提法、天然胶法等以获取含IgY的水溶性组分（WSF）；（2）通过有机物或无机物沉淀法、高分子聚合物沉淀法、离子交换色谱法等对IgY进行分离纯化。但是，现有的提取和纯化技术获得的IgY产品中往往存在有机物残留或含有加多的杂蛋白，纯度不高的问题，而且在整个提取过程中还会丢弃一些有附加值的物质，造成资源浪费。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提出了一种产品纯度高、易于保存和运输的卵黄免疫球蛋白的提取方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的，一种卵黄免疫球蛋白的提取方法，其特点是，包括如下步骤：

（1）原料处理：取新鲜鸡蛋，纯水浸泡25~30min后，用次氯酸钠消毒液消毒，再用纯水去除残留消毒液，沥干备用；

（2）除脂：取经步骤（1）处理得到的鸡蛋，分离卵清和卵黄，去除卵黄膜，得卵黄液，按重量比卵黄液：超纯水=1:7~15向卵黄液中加入0~4℃的超纯水，混匀，得卵黄稀释液；卵黄稀释液用食品酸度调节剂调pH至5.0~7.0，搅拌30~40min，于0~4℃静置8~15h后，0~4℃以6000~8000rpm离心35~40min，得沉淀物和上清液，取上清液备用；取蛋清和离心得到的沉淀物，分别经喷雾干燥，得蛋清粉和蛋黄粉；

（3）絮凝沉淀：在冰水浴条件下，向步骤（2）得到的上清液中边搅拌边依次加入质量浓度为0.8~1.5%的海藻酸钠水溶液和质量浓度为17~22%的氯化钙水溶液，其中，海藻酸钠水溶液的添加量为所述上清液体积的0.6~0.9%，氯化钙水溶液的添加量为所述上清液体积的0.24~0.32%，再用食品酸度调节剂调pH至4.5~8.5，搅拌30~50min，静置0.5~1h以产生絮凝，得絮凝液；

（4）过滤浓缩：用板框过滤器除去絮凝液中的絮凝物，过滤压力控制在0.6~0.8MPa，得粗滤液；粗滤液采用超滤膜进行过滤浓缩，得浓缩截留液；其中，超滤膜的截留分子量为30~100KD，超滤温度5~15℃，操作压力0.1~0.3MPa，超滤膜选自醋酸纤维素膜、聚醚砜膜、改性聚砜膜或聚偏氟乙烯膜；

（5）盐析：向浓缩截留液中加入其3~5倍体积的16%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得一次上清液；向一次上清液中加入其3~5倍体积的37%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得二次上清液；向二次上清液中加入其3~5倍体积的40%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得三次上清液；向三次上清液中加入其3~5倍体积的50%饱和盐析盐溶液，低温离心弃上清液，收集沉淀，即得卵黄免疫球蛋白粗提物；

或向浓缩截留液中加入其3~5倍体积的33%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得一次上清液；向一次上清液中加入其3~5倍体积的33%饱和盐析盐溶液，低温离心弃沉淀，得二次上清液；向二次上清液中加入其3~5倍体积的50%饱和盐析盐溶液，低温离心弃上清液，收集沉淀，即得卵黄免疫球蛋白粗提物；

所述的低温离心条件为：0~4℃以8000~12000rpm离心10~15min；

（6）纯化：采用离子交换层析法对卵黄免疫球蛋白粗提物进行纯化，得纯化后的卵黄免疫球蛋白溶液；

（7）微滤、干燥：用微滤膜孔径大小为0.22μm的微滤器对经步骤（6）处理得到的卵黄免疫球蛋白溶液进行过滤除菌，冷冻干燥，得IgY冻干粉。

本发明所述的卵黄免疫球蛋白的提取方法中，进一步优选的技术方案或者技术特征是：

1、在步骤（1）中：所述的鸡蛋为普通蛋鸡或经特定抗原免疫蛋鸡所产的新鲜鸡蛋，特定抗原为常见的人体致病菌或病毒培养提纯达到一定数量级，经灭活或裂解灭活作抗原，加上免疫佐剂，对15-20周龄健康蛋鸡进行3-6次免疫注射。

2、在步骤（2）和步骤（3）中：所述的食品酸度调节剂为醋酸、乳酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、柠檬酸钠、柠檬酸钾、碳酸钠中的一种。