[发明专利]原核苯丙氨酸解氨酶变异体的组合物以及利用其组合物的方法有效
| 申请号： | 201710117140.0 | 申请日： | 2011-02-03 |
| 公开（公告）号： | CN106834261B | 公开（公告）日： | 2022-02-18 |
| 发明（设计）人： | 奥古斯塔斯·O·奥克哈玛菲;肖恩·M·贝尔;G·尼克·泽切尔勒;克里斯·安东森;张彦宏;基尤·Y·莱;P·A·菲茨帕特里克;E·D·卡基斯;M·C·维拉德;丹尼尔·J·温特;穆巴拉克·穆塔利夫 | 申请（专利权）人： | 生物马林药物股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N9/96 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 郑霞 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明提供由原核生物产生的苯丙氨酸解氨酶(PAL)变异体，其中这类原核PAL变异体与野生型PAL相比具有较大的苯丙氨酸转化活性和/或降低的免疫原性。本发明进一步提供原核PAL及其生物活性片段、突变体、变异体或者类似物的组合物，以及用于生产、纯化、配制这类组合物以及将其用于工业和治疗目的(例如治疗高苯丙氨酸血症(包含苯丙酮尿症)以及其他疾病(包含癌症))的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 苯丙氨酸 解氨酶变 异体 组合 以及 利用 方法 | ||
【主权项】：
一种用于纯化具有最小聚集的多变鱼腥藻苯丙氨酸解氨酶(AvPAL)变异体的方法，该方法包括：(a)通过均化作用对包含该AvPAL变异体的细菌细胞进行裂解，以生成细胞裂解物；(b)加热该细胞裂解物至65℃达30至120min；(c)将加热的细胞裂解物离心，其中保留包括该AvPAL变异体的上清液；(d)将该上清液过滤，以去除沉淀物；和(e)通过在阴离子交换(AIEX)柱，然后在疏水作用(HIC)柱上进行的依序色谱法从污染蛋白质中分离该AvPAL变异体，其中来自该HIC柱的洗出液包括该AvPAL变异体；其中所述AvPAL变异体的位置503和565上的半胱氨酸残基已被丝氨酸残基取代(SEQ ID NO:11)。
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