[发明专利]利用乳腺生物反应器提高乳汁中褪黑素含量的方法有效
| 申请号： | 201710113626.7 | 申请日： | 2017-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN106947779B | 公开（公告）日： | 2021-02-26 |
| 发明（设计）人： | 刘国世;连正兴;马腾;何长久;张效生;邓守龙;宋玉坤;张金龙;姬鹏云;富俊才;韩红兵;田秀芝;陶景丽;李岩 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京睿阳联合知识产权代理有限公司 11758 | 代理人： | 王莹;杨金贤 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供一种利用乳腺生物反应器提高乳汁中褪黑素含量的方法，其是将褪黑素关键合成酶AANAT和HIOMT基因的cDNA序列连接酪蛋白启动子，通过高效的CRISPR/Cas9系统，整合到羊的染色体基因中，通过乳腺反应器表达酶AANAT和HIOMT，从而在乳腺中合成天然褪黑素。转基因羊乳腺反应器具有较高的重组褪黑素合成酶表达水平，并且能够提高乳汁中褪黑素含量。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 乳腺 生物反应器 提高 乳汁 中褪黑素 含量 方法 | ||
【主权项】：
过表达褪黑素关键合成酶AANAT和HIOMT基因的原核胚的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)分别将褪黑素关键合成酶AANAT和HIOMT的cDNA插入表达载体中，构建得到重组表达载体；(2)Cas9cDNA及sgRNA的制备：将经过密码子优化后的Cas9序列及sgRNA序列分别构建到包含T7启动子的载体上，然后通过体外转录分别得到Cas9cDNA及sgRNA产物并纯化；其中，sgRNA的作用位点位于羊MSTN基因第三外显子区，sgRNA作用位点的核苷酸序列为5’‑GACATCTTTGTAGGAGTACAGCAA‑3’；Cas9cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；(3)将(1)构建的重组表达载体线性化，然后与Cas9cDNA及sgRNA一起导入哺乳动物的原核期胚胎细胞中，即得。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业大学，未经中国农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710113626.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
