[发明专利]一种莼菜丛生芽的诱导方法

摘要

本发明公开了一种莼菜丛生芽的诱导方法，属于莼菜的组织培养领域。诱导方法步骤包括：外植体选择与预处理、外植体灭菌、芽诱导、芽增殖培养。培养基组成成分包括大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、有机成分、无机添加物、植物生长调节剂、生理活性物质、碳源、凝固剂及其它添加物等。本发明提供了莼菜丛生芽诱导的培养基及培养方法，可以有效提高莼菜芽诱导率，且芽分化率高，后期可以在短期内形成大量优良的试管苗，为我国的特种水生蔬菜培育提供种苗。本发明不仅可以用于莼菜的育种，还可以应用于莼菜离体快繁、种质保存等领域。

主权项

1.一种莼菜丛生芽的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：A、外植体选择与预处理：选择颜色鲜绿，淤泥覆盖少的可萌发腋芽的莼菜茎段作为外植体，用碱性洗涤剂浸泡10min，除去表面淤泥，再用自来水冲洗1小时，用蒸馏水反复冲洗4‑5次，用无菌水再反复清洗4‑5次，置于无菌操作台；B、外植体灭菌：在无菌操作台上首先用75%乙醇浸泡30秒，用无菌水冲洗4‑5次，再进行表面消毒，无菌水冲洗4‑5次，在无菌滤纸上将水吸干，待用；C、芽诱导：选择1.0 mg/L 6‑BA和0.15 mg/L NAA的MS固体培养基，蔗糖质量浓度为3%，活性炭质量浓度为0.4%，pH调至5.8‑6.0，固体培养基装于组培瓶中；固体培养基经过120℃灭菌处理20min，冷却后，接入灭菌后的1‑1.5cm的莼菜外植体，加入无菌水超过固体培养基面3‑4cm，置于光照培养箱中培养，待幼芽长至2.0‑3.0cm进行增殖培养；D、芽增殖培养：选择蔗糖质量浓度3%，活性炭质量浓度为0.4%的MS固体培养基，添加0.5‑2.0 mg/L 6‑BA、2‑4 mg/L 2,4‑D、0.1‑0.5 mg/L NAA的激素；培养基分装、培养基灭菌方式与芽诱导相同，加入无菌水超过固体培养基面3‑4cm，接入长2.0‑3.0cm的幼芽于光照培养箱中，进行增殖培养；所述的步骤C、D均采用无菌环境，光照60‑70μE/（m2·s），光照周期为12h/d，室内温度25±2℃。