[发明专利]一种莼菜丛生芽的诱导方法

说明书

本发明公开了一种莼菜丛生芽的诱导方法，属于莼菜的组织培养领域。诱导方法步骤包括：外植体选择与预处理、外植体灭菌、芽诱导、芽增殖培养。培养基组成成分包括大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、有机成分、无机添加物、植物生长调节剂、生理活性物质、碳源、凝固剂及其它添加物等。本发明提供了莼菜丛生芽诱导的培养基及培养方法，可以有效提高莼菜芽诱导率，且芽分化率高，后期可以在短期内形成大量优良的试管苗，为我国的特种水生蔬菜培育提供种苗。本发明不仅可以用于莼菜的育种，还可以应用于莼菜离体快繁、种质保存等领域。

技术领域

本发明提供一种莼菜丛生芽的诱导方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

莼菜，属睡莲科的一种水草，列入中国国家Ⅰ级重点保护野生植物（国务院1999年8月4日批准），是珍贵的野生水生蔬菜，含有酸性多糖、蛋白质、氨基酸、维生素、组胺和微量元素等，其价值主要体现在医用价值和食用价值。莼菜含有丰富的胶质蛋白、碳水化合物，脂肪、多种维生素和矿物质，常食莼菜具有药食两用的保健作用，是珍贵的水生蔬菜之一。

但是由于多年未做有效的品种提纯复壮和品种保护，莼菜种性退化已经比较严重，质量和产量都在下降。

目前尚缺乏成熟技术，可以大规模扩繁莼菜优质工程苗，同时克服该物种在自然环境中种源有限且品种逐渐退化的问题。

发明内容

本发明提供了一种莼菜丛生芽诱导的培养基及诱导方法，该方法是在无菌条件下，采取控温措施，给予固定光照，诱导莼菜丛生芽，逐步成绩无菌苗体系，后期可常年提供大量无菌幼苗。方法易行，操作方便，产量高。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种莼菜丛生芽的诱导方法，包括以下步骤：

A、外植体选择与预处理：选择颜色鲜绿、淤泥覆盖少的可萌发腋芽的莼菜茎段作为外植体，用碱性洗涤剂浸泡10min，用软毛刷轻轻刷掉表面淤泥至茎段呈绿色，用自来水冲洗1小时，用蒸馏水反复冲洗4-5次，用无菌水再反复清洗4-5次，待用；

B、外植体灭菌：在无菌操作台上首先用75%乙醇浸泡30秒，用无菌水冲洗4-5次，再用0.1%氯化汞(加入几滴吐温80)进行表面消毒10分钟，无菌水冲洗4-5次，在无菌滤纸上将水吸干，待用；

C、芽诱导：选择1.0 mg/L 6-BA和0.15 mg/L NAA的MS固体培养基，蔗糖质量浓度为3%，活性炭质量浓度为0.4%，pH调至5.8-6.0，固体培养基装于组 培 瓶 中；固体培养基经过120℃灭菌处理20min，冷却后，接入灭菌后的1-1.5cm的莼菜外植体，加入无菌水超过固体培养基面3-4cm，置于光照培养箱中培养，待幼芽长至2.0-3.0cm进行增殖培养；

D、芽增殖培养：选择蔗糖质量浓度3%，活性炭质量浓度为0.4%的MS固体培养基，添加0.5-2.00 mg/L 6-BA、2-4 mg/L 2,4-D、0.1-0.50 mg/L NAA的激素；培养基分装、培养基灭菌方式与芽诱导相同，加入无菌水超过固体培养基面3-4cm，接入长2.0-3.0cm的幼芽于光照培养箱中，进行增殖培养；

所述的步骤C、D均为无菌环境，光照60-70μE/（m²·s），光照周期为12h/d，室内温度（25±2）℃。

优选的，步骤B中，用0.1%氯化汞（加入几滴吐温80）进行表面消毒10min，步骤C中，6-BA的浓度为1.0mg/L，NAA 的浓度为0.15mg/L。

本发明具有以下有益效果：