[发明专利]高压液相色谱-质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法

摘要

本发明公开的是高压液相色谱‑质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法，包括以下步骤：1)水样的pH调节；2)调节pH后水样的固相萃取富集浓缩；3)使用高压液相色谱‑质谱仪检测；4)结果分析。本发明的高压液相色谱‑质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法具有检测时间短、灵敏度高的特点，是一种新型的对于水环境样品中多种抗生素含量的测定方法，该方法大大降低了对目标物的检测的干扰，能够对痕量和多种抗生素同时进行高灵敏度的检测。使用本发明的检测方法对于9种抗生素的质量准确度小于1ppm，检测限为0.1‑5ug/L，添加回收率为70‑100％，相对标准偏差小于10％。

主权项

1.高压液相色谱‑质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)水样的pH调节：量取一份250mL水样，加入适量甲酸，调节pH至2.0，另量取一份250mL水样，加入适量氨水，调节pH至12.0；2)调节pH后水样的固相萃取富集浓缩：分别用5mL甲醇和10mL去离子水活化固相萃取柱1，流速为5‑10mL/min活化后将pH调至2.0的250mL水样过固相萃取柱1，流速为3‑5mL/min，水样过完固相萃取柱1后，用5mL去离子水快速冲洗固相萃取柱1，流速为5‑10mL/min，然后将固相萃取柱1干燥30min，最后用5mL甲醇以3mL/min流速洗脱固相萃取柱1，收集洗脱液，标记为洗脱液1；分别用5mL甲醇和10mL去离子水活化固相萃取柱2，流速为5‑10mL/min活化后将pH调至12.0的250mL水样过固相萃取柱2，流速为3‑5mL/min，水样过完固相萃取柱2后，用5mL去离子水快速冲洗固相萃取柱2，流速为5‑10mL/min，然后将固相萃取柱2干燥30min，最后用5mL甲醇以3mL/min流速洗脱固相萃取柱2，收集洗脱液，标记为洗脱液2；合并洗脱液1和2，在40℃水浴中，用温和的氮气吹干，最后用水定容至1mL，即得到样品溶液；3)使用高压液相色谱‑质谱仪检测：a.标准溶液的制备：分别准确称取标准品抗生素，使用去离子水溶解，分别配成0.2mg/mL的标准储备溶液，使用时根据各抗生素的响应，用去离子水稀释成标准工作液；b.使用高压液相色谱‑质谱仪检测标准工作液和样品溶液：由自动进样器分别吸取标准工作液和样品溶液，注入高压液相色谱‑质谱仪中，样品中的抗生素组分经液相色谱柱分离，质谱仪多反应监测模式检测；4)数据分析：以化合物的母离子/子离子对为定量离子和定性离子；以标准工作液的质量浓度X为横坐标，定量定性离子的峰面积Y为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行单离子外标法定量；用样品溶液中出现的色谱峰保留时间和母离子/子离子对进行定性；所述步骤1)中所用的甲酸和氨水均为优级纯；所述步骤2)中所用的固相萃取柱1和固相萃取柱2为Waters Oasis HLB固相萃取柱，规格为6cc/500mg，60μm；所述步骤3)中的抗生素标准品分别为潮霉素、洛伐他汀、阿卡波糖、泰乐菌素、红霉素、磺胺嘧啶、庆大霉素、青霉素、磺胺甲恶唑；所述步骤3)中液相色谱条件：色谱柱：SB‑C18，3.5μm，2.1×150mm；流动相：A为0.1％甲酸，B为乙腈；梯度洗脱：0‑2min，10％B；2‑7min，10‑40％B，7‑9min，40‑90％B，9‑10min，90‑100％B；柱温：室温；所述步骤3)中质谱条件：质量分析器：三重四级杆，扫描模式：正离子‑反应监测模式，离子源：电喷雾离子源，喷雾电压：4.5kV，去溶剂温度：500℃，去溶剂气体流速：600L/h。