[发明专利]高压液相色谱-质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法

说明书

本发明公开的是高压液相色谱‑质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法，包括以下步骤：1)水样的pH调节；2)调节pH后水样的固相萃取富集浓缩；3)使用高压液相色谱‑质谱仪检测；4)结果分析。本发明的高压液相色谱‑质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法具有检测时间短、灵敏度高的特点，是一种新型的对于水环境样品中多种抗生素含量的测定方法，该方法大大降低了对目标物的检测的干扰，能够对痕量和多种抗生素同时进行高灵敏度的检测。使用本发明的检测方法对于9种抗生素的质量准确度小于1ppm，检测限为0.1‑5ug/L，添加回收率为70‑100％，相对标准偏差小于10％。

技术领域

本发明涉及环境检测技术领域，具体是涉及高压液相色谱-质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法。

背景技术

健康水平的日益提高和新型药物不断投入临床应用使人们对抗生素的依赖越来越强，无论抗生素的种类还是数量都呈逐年增加的趋势，抗生素的大量使用不可避免地导致其通过多种途径进入环境。越来越多的研究发现环境中的抗生素对环境生物具有一定的毒性，环境中的抗生素已逐渐成为公认的新型污染物，对环境中抗生素的检测已经是目前国内外环境检测、治理和评价的重要内容。

目前，抗生素的检测主要有气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法。气相色谱和液相色谱主要依赖色谱柱分离和检测器对抗生素响应度，对单组分或简单体系中抗生素检测具有较好的定量和定性效果，而由于水环境基体较为复杂，包含多种有机物质或干扰离子，色谱在抗生素定性和定量上存在一定难度。气相色谱-质谱联用和液相色谱-质谱联用主要利用色谱柱分离，质量分析器根据测定的分子量以及该分子量物质的强度进行定性和定量，较之气相色谱和液相色谱，色谱与质谱联用技术可较好地完成复杂样品的定性和定量，然而由于环境中存在大量的有机质，背景干扰较严重，相同分子量的物质种类仍然很多，所以易造成测定结果的假阳性。

三重四级杆技术通过施加能量，将化合物分子打成碎片，每种化合物在一定条件下均有自己的特征碎片，通过同时测定化合物本身分子量和特征碎片分子量对化合物进行定性和定量不但能减少对化合物的误判降低假阳性判定，而且大大提高检测灵敏度。目前国内对高压液相色谱-质谱仪联用法测定水中抗生素研究较少，在降低对定性和定量干扰难题方面还没有在环境检测行业引起关注。

发明内容

本发明解决的技术问题是，提供一种快速、简便、灵敏度高，且有效减少或消除来自水环境中的复杂基质干扰抗生素含量的高压液相色谱-质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法。

本发明的技术方案是：高压液相色谱-质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法，包括以下步骤：

1)水样的pH调节：量取一份250mL水样，加入适量甲酸，调节pH至2.0，另量取一份250mL水样，加入适量氨水，调节pH至12.0；

2)调节pH后水样的固相萃取富集浓缩：分别用5mL甲醇和10mL去离子水活化固相萃取柱1，流速为5-10mL/min活化后将pH调至2.0的250mL水样过固相萃取柱，流速为3-5mL/min，水样过完固相萃取柱后，用5mL去离子水快速冲洗固相萃取柱，流速为5-10mL/min，然后干燥固相萃取柱30min，最后用5mL甲醇以3mL/min流速洗脱固相萃取柱，收集洗脱液，标记为洗脱液1；分别用5mL甲醇和10mL去离子水活化固相萃取柱2，流速为5-10mL/min活化后将pH调至12.0的250mL水样过固相萃取柱，流速为3-5mL/min，水样过完固相萃取柱后，用5mL去离子水快速冲洗固相萃取柱，流速为5-10mL/min，然后干燥固相萃取柱30min，最后用5mL甲醇以3mL/min流速洗脱固相萃取柱，收集洗脱液，标记为洗脱液2；合并洗脱液1和2，在40℃水浴中，用温和的氮气吹干，最后用水定容至1mL，再过0.45um聚四氟乙烯滤膜，即得到样品溶液；

3)使用高压液相色谱-质谱仪检测：