[发明专利]一种来源于马粪海胆生殖腺的水溶性多糖的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及医药领域，具体涉及一种来源于马粪海胆生殖腺的水溶性多糖的制备方法及其应用。本发明具体方法为高温加热使海胆生殖腺中的酶失活，然后以低于60℃水提取多糖，提取液离心，上清液减压浓缩，依次用木瓜蛋白酶酶解和Sevage法除蛋白，水溶液经透析、醇沉、干燥得海胆总多糖，总多糖用凝胶柱色谱分离纯化得到两个多糖。本发明所用的提取温度低，不影响多糖结构和活性，提取液中杂质少，后处理方法简单，极大地降低了生产成本。所得总多糖性状和复溶性好，易于制备多种药物制剂。总多糖及其含有的两种多糖均有较好的抗肿瘤作用，可开发成无毒副作用的抗肿瘤药物。

主权项

1.一种来源于马粪海胆生殖腺的水溶性多糖的制备方法，特征在于按如下具体步骤进行：a、取新鲜马粪海胆的海胆生殖腺，粉碎后用丙酮脱脂，获得海胆黄脱脂粉末；b、脱脂粉末用2倍量体积的90‑100℃热水处理10‑30min；而后加入8倍量体积的20‑60℃水中提取2‑6小时，再用10‑20倍量体积的20‑60℃水提取2‑3次，合并提取液浓缩至总体积的二分之一；c、向步骤b获得的浓缩液中加入木瓜蛋白酶，酶解后，加热灭活后再用Sevage法除蛋白10‑15次，用旋转蒸发仪减压浓缩；d、步骤c得到的多糖水溶液经流动蒸馏水透析，透析后的水液加入4倍量无水乙醇，离心得多糖沉淀，用无水乙醇洗涤、干燥得马粪海胆总多糖HPP；e、将步骤d所得马粪海胆总多糖配制成50mg/ml的水溶液，用SephacrylS‑300凝胶柱色谱分离，双蒸水为流动相洗脱，每10ml收集一管，苯酚‑硫酸法测定每管多糖含量，根据洗脱曲线合并洗脱液，冷冻干燥得到两个马粪海胆多糖，分别命名为HPP‑1和HPP‑2；步骤a中，海胆生殖腺利用组织匀浆机充分粉碎后，加入1‑2倍量体积的无水丙酮，常温搅拌脱脂，重复脱脂7‑10次；步骤b中，按脱脂粉末：蛋白酶＝100:(4‑8)的质量比向浓缩液中加入木瓜蛋白酶，酶解20‑30h。