[发明专利]一种烟叶中FⅠ叶蛋白提取和分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种烟叶中FⅠ叶蛋白提取和分离纯化方法，所述的烟叶中FⅠ叶蛋白提取和分离纯化方法包括样品采集、FⅠ叶蛋白提取、FⅠ叶蛋白分离、FⅠ叶蛋白纯化、FⅠ叶蛋白结晶步骤。本发明能够有效提高FⅠ叶蛋白的纯度和回收率，有利于拓展烟叶非烟用途，促进烟叶资源的高效利用。

主权项

一种烟叶中FⅠ叶蛋白提取和分离纯化方法，其特征在于所述的烟叶中FⅠ叶蛋白提取和分离纯化方法包括样品采集、FⅠ叶蛋白提取、FⅠ叶蛋白分离、FⅠ叶蛋白纯化、FⅠ叶蛋白结晶步骤，具体包括：A、样品采集：采集绿色烟叶，然后避光存放6~24h备用；B、FⅠ叶蛋白提取：将A步骤得到的烟叶片去掉主脉，置入组织捣碎机中，加入烟叶片重量体积0.1~0.3倍的0.1M NaCl溶液，同时加入烟叶片重量0.04~0.06倍的711阴离子交换树脂，用组织捣碎机磨浆0.5~1.5min得到匀浆液，将匀浆液过滤得到滤液，调节滤液的pH值为7.3~7.6，快速加热滤液至45~55℃，并维持20~40min，然后迅速冷却至20℃，然后转入离心机离心得到离心上清液；C、FⅠ叶蛋白分离：取B步骤的离心上清液，用(NH4)2SO4盐析，取45%～55%盐析出的蛋白质沉淀段得到沉淀a；D、FⅠ叶蛋白纯化：将沉淀a用柱平衡缓冲液溶解得到蛋白初溶液b，将蛋白初溶液b通过经缓冲液平衡过的葡聚糖凝胶G‑50柱，以1.5ml/min的流速洗脱，收集第6~7ml的洗脱液即为分离得到的FⅠ叶蛋白溶液；E、FⅠ叶蛋白结晶：向收集的FⅠ叶蛋白溶液中加入等体积的0.025M Tris‑Cl，pH7.4缓冲液得到稀释后的蛋白流出液，于4℃静置结晶得到FⅠ叶蛋白结晶。