[发明专利]一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法有效
| 申请号： | 201611020027.2 | 申请日： | 2016-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN108089004B | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 张丽华;吴琼;袁辉明;杨开广;张玉奎 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/58 |
| 代理公司： | 21002 沈阳科苑专利商标代理有限公司 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法。所述的方法分为两条路线：路线A和路线B。其中，路线A是把蛋白酶解产生的肽段与碘乙酰胺的小球孵育，对巯基肽段和硫巯基肽段进行富集后；通过还原剂将硫巯基肽段的二硫键还原释放，进而用可断裂的同位素亲和标签标记释放下来的硫巯基肽段，最后使用裂解液将可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂。路线B是用可断裂的同位素亲和标签标记含巯基和硫巯基的蛋白、蛋白酶解、亲和富集巯基肽段和硫巯基肽段；最后用裂解液将连接在巯基肽段和硫巯基肽段上的可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂。该方法具有选择性好、假阳性低等优点，可实现复杂蛋白质组样品中规模化硫巯化肽段的定性与定量。 | ||
| 搜索关键词： | 巯基肽 亲和标签 同位素 可断裂 肽段 巯化 翻译后修饰 定性 蛋白酶解 连接臂 裂解液 巯基 断裂 复杂蛋白质 碘乙酰胺 亲和富集 释放 二硫键 规模化 还原剂 假阳性 孵育 富集 小球 还原 蛋白 | ||
【主权项】：
1.一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法，其特征在于：分为路线A和路线B；/n其中，路线A是把蛋白酶解产生的肽段与碘乙酰胺的小球进行孵育，对巯基肽段和硫巯基肽段进行富集；通过还原剂将硫巯基肽段的二硫键还原释放，进而用可断裂的同位素亲和标签标记释放下来的硫巯基肽段，最后使用裂解液将可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂；/n路线B是用可断裂的同位素亲和标签标记含巯基和硫巯基的蛋白、蛋白酶解、亲和富集巯基肽段和硫巯基肽段，最后使用裂解液将连接在巯基肽段和硫巯基肽段上的可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂；/n将路线A得到的肽段进行质谱鉴定, 鉴定得到的肽段二级质谱信息生成参考库；利用质谱的离子监测技术PRM（parallel reaction monitoring）对路线B得到的肽段进行质谱鉴定，将路线B鉴定得到的肽段二级质谱信息与路线A生成的参考库中的肽段二级质谱信息进行比对，从而实现对硫巯化肽段的定性与定量；/n对硫巯化肽段的定性与定量的过程为，将路线B鉴定到的肽段二级质谱信息与路线A生成的参考库中的肽段二级质谱信息进行比对，从中挑取含有半胱氨酸的肽段序列和带有硫巯基修饰位点信息的高匹配度的肽段，即为硫巯化肽段的定性；利用可断裂的同位素亲和标签中的同位素
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院大连化学物理研究所，未经中国科学院大连化学物理研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201611020027.2/，转载请声明来源钻瓜专利网。
