[发明专利]一种改良的绿色荧光蛋白表达载体及其构建方法在审
| 申请号： | 201610942279.4 | 申请日： | 2016-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN106497953A | 公开（公告）日： | 2017-03-15 |
| 发明（设计）人： | 杨子银;梅鑫;周瀛;傅秀敏;东方 | 申请（专利权）人： | 中国科学院华南植物园 |
| 主分类号： | C12N15/65 | 分类号： | C12N15/65;C12N15/66 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510650 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种改良的绿色荧光蛋白表达载体的构建方法。本发明根据载体pBE‑GFP序列(源自pBin19，其是将GFP基因插入到pBin19载体的Age1和Sac1酶切位点之间)，选择其中一段约1000bp的序列设计一对上游引物pBE‑GFPST‑Hind3‑F和下游引物pBE‑GFPST‑Sal1‑R，在其两头的在其两头的粘性末端酶Hind3和Sal1中插入了新的唯一的酶切位点Spe1、Xho1、Fse1，从而使粘性末端的酶总数达到8个，并拉开了几个常用廉价高效酶之间的距离，确保了足够的保护碱基数量。此外，还在前面接上S‑Tag标签AAAGAAACCGCTGCTGCTAAATTCGAACGCCAGCACATGGACAGC。通过PCR后酶切连接获得新的表达载体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 改良 绿色 荧光 蛋白 表达 载体 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种改良的绿色荧光蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：以载体pBE‑GFP为模板，以上游引物pBE‑GFPST‑Hind3‑F和下游引物pBE‑GFPST‑Sal1‑R作为引物进行PCR扩增，扩增产物用Hind3和Sal1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为插入子；将载体pBE‑GFP用Hind3和Sal1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为酶切载体，将插入子和酶切载体连接获得改良的绿色荧光蛋白表达载体；所述的上游引物pBE‑GFPST‑Hind3‑F的核苷酸序列为：5’‑CGCCAAGCTTGCATGCCTGCAGGTCC‑3’；所述的下游引物pBE‑GFPST‑Sal1‑R的核苷酸序列为:5’‑AATGTCGACGGCCGGCCTCGAGATGGACTAGTAGCTCTAGAGCTGTCCATGTGCTGGCGTTCGAATTTAGCAGCAGCGGTTTCTTTCATGTCCCCCGTGTTC‑3’。
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