[发明专利]提高液体培养的牛樟芝菌丝体中三萜类成分含量的方法

摘要

本发明公开了一种提高液体培养的牛樟芝菌丝体总三萜含量的方法，包括：（1）液体种子制备：用固体胡萝卜培养基对保存菌种活化，28℃培养10‑20天。将3%‑10%的麦芽粉碎、煮沸15‑30min，过滤、定容、灭菌、冷却后，接种固体牛樟芝菌种，摇瓶培养7‑11天。（2）诱导物制备：称取一定量20‑100目的连翘粉末，加十倍重量的乙醇，室温浸提48h以上，过滤，浓缩，每克连翘药材得到1ml浓缩液。（3）牛樟芝菌丝体液体发酵培养：含有3%‑10%的大麦芽粉碎至无完整麦粒、煮汁后的滤液，按照1%‑2.5%加入连翘浸提浓缩液作为诱导物，灭菌并冷却后，接种5%‑10%液体牛樟芝种子，置于25℃‑30℃的旋转式摇床中进行暗培养13‑22天，过滤、干燥，获得总三萜含量高于6%的牛樟芝液体发酵菌丝体，本发明操作简单，原料易得，成本低，三萜含量得到明显提高。

主权项

提高液体培养的牛樟芝菌丝体总三萜含量的方法，其特征在于其包括如下步骤：菌种活化：采用胡萝卜培养基对保存的牛樟芝菌种进行活化；配制胡萝卜培养基，按重量百分比：15%‑25%胡萝卜（切成1cm3 大小，沸水煮20min），1%‑3%葡萄糖，1.5%‑2.0%琼脂，余量水，pH自然；将低温保藏菌种在无菌条件下接入胡萝卜培养基，置于28℃恒温培养箱中培养10‑20天；液体种子制备：配制液体种子培养基，按重量百分比：将3%‑10%的粉碎至无完整麦粒的麦芽加入沸水煮15min‑30min，过滤，取滤液定容，pH自然；将配制好的液体种子培养基分装入500ml锥形瓶中，每瓶装100 ml ‑200ml，食用菌专用封口膜封口，在121℃条件下灭菌30min，取出培养基，自然冷却至20~30℃；在无菌条件下每瓶接入2粒（黄豆粒大小）活化好的菌种，封口；置于旋转式摇床上转速120rpm、温度25℃‑28℃条件下培养7‑11天，成为牛樟芝液体种子；连翘醇提液的制备：将烘干后的连翘研磨成20‑100目粉末，称取20‑50克加入烧杯中，加入十倍重量的重量浓度为95‑100%的乙醇，封口，室温浸提48h以上，期间搅拌3‑4次；连翘浸提完毕后，进行过滤浓缩，浓缩至原体积的十分之一，每克连翘药材得到1ml浓缩液；液体发酵培养基制备：配制液体培养基，按重量百分比：将3%‑10%的粉碎至无完整麦粒的麦芽加入沸水煮20min，过滤，取滤液将浓缩好的连翘醇提液按照生药干重的1%‑2.5%诱导浓度作为诱导物加入液体培养基中，定容，pH自然；用500ml三角瓶，装量150ml/500ml瓶，用封口膜封好，放入灭菌锅中121℃，灭菌30min；接种：待液体发酵培养基冷却后，在超净工作台中，将牛樟芝液体种子摇匀，酒精灯的火焰无菌区内将牛樟芝液体种子的培养基口打开，灼烧瓶口；在酒精灯的火焰无菌区内将液体发酵培养基口打开，灼烧瓶口，用移液枪按照接种量5%‑10%吸取牛樟芝液体种子，接入液体发酵培养基中，封口，用棉绳扎紧；培养管理：将接种完的培养瓶置于25℃‑30℃的旋转式摇床中进行暗培养13‑22天，过滤、烘干，得到总三萜含量大于6%的牛樟芝液体发酵菌丝体。