[发明专利]一种培养人脐带间充质干细胞的方法在审
| 申请号： | 201610910134.6 | 申请日： | 2016-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN106566804A | 公开（公告）日： | 2017-04-19 |
| 发明（设计）人： | 陈继冰;吴振化 | 申请（专利权）人： | 浙江译美生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京维正专利代理有限公司11508 | 代理人： | 林乐飞 |
| 地址： | 310020 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 一种培养人脐带间充质干细胞的方法，包括以下步骤采集新鲜的人脐带，切除双侧带夹痕及淤血的部分，用含双抗的PBS缓冲液充分冲洗脐带外周以及脐静脉内腔；沿脐静脉内腔纵向剪开血管，剥离脐静脉内膜，将剩余组织切成小块，贴于预先用完全培养基A润湿的T25培养瓶底壁；将T25培养瓶，置于37 ℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱中，过夜后翻转；每24 h加入1mL上述完全培养基A，72 h全量换液，以后每周换液2次，观察贴块周围贴壁细胞爬出情况，2周后去贴块；当细胞达70%～80%融合时，以含1.25g/L胰蛋白酶和1g/L乙二胺四乙酸的消化液消化后，以(2.5～5.0)×103/cm2密度接种传代培养，计为第一代细胞。该种方法及能保证充质干细胞的活性又能提高培养效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 培养 脐带 间充质 干细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种培养人脐带间充质干细胞的方法，包括以下步骤：S1、采集新鲜的人脐带，切除双侧带夹痕及淤血的部分，用含双抗的PBS缓冲液充分冲洗脐带外周以及脐静脉内腔；S2、沿脐静脉内腔纵向剪开血管，剥离脐静脉内膜，将剩余组织切成小块，贴于预先用完全培养基A润湿的T25培养瓶底壁；S3、将S2中的T25培养瓶底壁，置于37 ℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱中，过夜后翻转；S4、每24 h加入1mL上述完全培养基A，72 h全量换液，以后每周换液2次，观察贴块周围贴壁细胞爬出情况，2周后去贴块；S5、当细胞达70%～80%融合时，以含1.25g/L胰蛋白酶和1g/L乙二胺四乙酸的消化液消化后，以(2.5～5.0)×103/cm2密度接种传代培养，计为第一代细胞。
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