[发明专利]一种制备菜豆凝集素的方法

摘要

本发明公开了一种制备菜豆凝集素的方法，该方法它是以菜豆未成熟胚为外植体，经组织培养技术来产生大量愈伤组织，再将愈伤组织处理为浸提液，经过硫酸铵盐析，透析除盐，DEAE‑52阴离子交换层析，超滤浓缩，Superdex‑200凝胶过滤层析，冷冻干燥即可获得大量高纯度菜豆凝集素。该方法克服了菜豆凝集素的产量受菜豆种植周期和条件限制，且难以大量提取和杂质较多等缺陷；本方法系统性、综合性强；方法操作简便，适应性广，可助其他植物蛋白制备借鉴；可大量制备菜豆凝集素。

主权项

一种制备菜豆凝集素的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)将选取的菜豆未成熟胚消毒和切段，接种于愈伤培养基上，培养得到愈伤组织；2)将步骤1)得到愈伤组织加入磷酸盐缓冲液PBS中，冰浴研磨，然后置于摇床内震荡提取；最后置于离心机中离心得到上清液；3)向步骤2)得到的上清液中加入硫酸铵粉末，使上清液中的硫酸铵饱和度达到30％，冰浴1～3h，离心得到一级沉淀物和一级盐析液，向一级盐析液中继续加入硫酸铵粉末，使一级盐析液中的硫酸铵饱和度达到90％，冰浴1～3h，离心得到二级沉淀物和二级盐析液，收集二级沉淀物并用磷酸盐缓冲液PBS重溶至原体积；得到盐析样品溶液；4)将步骤3)得到的盐析样品溶液用10KD透析袋透析除盐，使用磷酸盐缓冲液PBS透析，每5～7h换液一次，直到析出液用BaCl2检测不出白色沉淀，然后继续用蒸馏水透析，得到除盐样品；5)将透析除盐后样品加入预处理过的DEAE‑52阴离子交换柱中，洗脱并收集洗脱液体，然后将有活性的洗脱液体用超滤管浓缩，得到浓缩液；6)将浓缩液滤膜过滤得到滤液，再将滤液加入平衡好的凝胶柱中，洗脱并收集洗脱液体，将有活性的洗脱液体冷冻干燥，得到干粉即凝集素。