[发明专利]一种利用CRISPR/Cas9系统共同敲除山羊MSTN和FGF5基因的方法有效
| 申请号： | 201610854586.7 | 申请日： | 2016-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN106957857A | 公开（公告）日： | 2017-07-18 |
| 发明（设计）人： | 王小龙;陈玉林;蔡蓓;牛怡源;马宝华 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 710000 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用CRISPR/Cas9系统共同敲除山羊MSTN和FGF5基因的方法。本发明首先获得针对山羊MSTN第二外显子和第三外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列，及针对山羊FGF5第一外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列，分别设计并合成相应的sgRNA寡核苷酸序列；接着分别构建针对MSTN第二外显子和第三外显子、FGF5第一外显子且含T7启动子的体外转录载体；利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA和sgRNA，可用于生产MSTN和FGF5共同敲除的转基因山羊。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 crispr cas9 系统 共同 山羊 mstn fgf5 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种利用CRISPR/Cas9系统共同敲除山羊MSTN和FGF5基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建特异性靶向MSTN第二外显子和第三外显子、FGF5第一外显子的sgRNA的体外转录载体；通过体外转录得到MSTN第二外显子和第三外显子的sgRNA‑1M、sgRNA‑2M，FGF5第一外显子的sgRNA‑1F、sgRNA‑2F；(2)体外转录Cas9蛋白的体外转录载体，得到Cas9 mRNA；(3)将步骤(1)和步骤(2)的sgRNA‑1M、sgRNA‑2M、sgRNA‑1F、sgRNA‑2F及Cas9 mRNA纯化后测浓度，将sgRNA‑1M、sgRNA‑2M、sgRNA‑1F、sgRNA‑2F和Cas9 mRNA混合，注射入山羊受精卵细胞质中，然后经体外培养后移植入同种雌性山羊输卵管中，用于生产共同敲除MSTN和FGF5的转基因山羊。
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