[发明专利]一种微波辅助与膜过滤制备淡水鱼血肽的方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种微波辅助与膜过滤制备淡水鱼血肽的方法。一种微波辅助与膜过滤制备淡水鱼血肽的方法，包括以下步骤：抗凝处理、沉淀、酶解、破壁、微波辅助分段酶解、酶解1、酶解2、灭酶活、过滤和喷雾干燥。本发明的微波辅助与膜过滤制备淡水鱼血肽的方法具有收率高、纯度高、溶剂消耗少、成本低和易于工业化生产的优点。本发明整个工艺流程短、时间短，能耗低、污染少、不使用有毒试剂、无污染物排放，达到清洁生产目标。

主权项

一种微波辅助与膜过滤制备淡水鱼血肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)抗凝淡水鱼血的制备：先将抗凝剂溶液放入容器1中，然后取新鲜淡水鱼血放入该容器中，搅拌均匀，低温静置，得到抗凝淡水鱼血；(2)血浆、血球分离：抗凝淡水鱼血上层为血浆，下层为血球，用虹吸法将血浆吸到容器2中；余下的血球经离心后，将上层血浆合并到容器2中低温冷冻备用，血球则冷冻贮藏至容器3中过夜待用；(3)血浆沉淀收集凝血酶原：容器2中的血浆解冻后，滤除上层漂浮的白色絮状物后，用2‑8倍生理盐水稀释后再用2mol/L醋酸调pH至5.1‑5.2，低温静置过夜，收集沉淀，即得凝血酶原；(4)凝血粗酶液制备：将收集的凝血酶原沉淀溶解于生理盐水中，启动微波装置加热保温至37℃，用1.0％CaCl₂溶液，搅拌20‑30min，激活凝血酶原，过滤收集滤液，即得凝血酶粗酶液；(5)凝血酶的制备：向凝血酶粗酶液中加入冷生理盐水，用超滤膜处理，浓缩至原体积的l/20‑1/25后，收集截留液，该截留液即为精制凝血酶液，将截留液冷冻干燥，即得粉状凝血酶；(6)血球破壁、溶血：向容器3中加入生理盐水，得到血球溶液，升温至10‑15℃，搅拌20‑30min；(7)血球蛋白分段酶解：用4.0moL/L NaOH调节pH至7.5，启动微波装置，将温度升至37‑40℃，按底物质量2‑2.5％加入复合蛋白酶I，保温2h后，再升温至55‑60℃，保温1.5‑2h；调节pH至9.0，按底物质量3‑4.5％加入复合蛋白酶II，再启动微波提取装置，保温2h，使血球蛋白充分水解；(8)淡水鱼血肽制备：酶解结束后，冷却至常温，用0.22um的滤膜过滤除菌，喷雾干燥，即得到淡水鱼血肽粉末。