[发明专利]phi29DNA聚合酶的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201610647512.6 | 申请日： | 2016-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN106367407A | 公开（公告）日： | 2017-02-01 |
| 发明（设计）人： | 闫林慧;赵曼曼;陈飞;朱梦清 | 申请（专利权）人： | 吴江近岸蛋白质科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 215200 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种phi29 DNA聚合酶的制备方法及其应用，具体为phi29 DNA聚合酶在制备DNA Marker模板质粒中的应用。该方法包括phi29 DNA聚合酶原核构建、筛选表达菌株以及phi29重组蛋白的纯化等步骤，将菌株接种到培养基中，经诱导表达后，收集菌体；菌体经破菌、纯化后，得到所述phi29 DNA聚合酶。phi29 DNA聚合酶应用于制备质粒模板可以省去细胞培养、细菌的收集和裂解以及质粒DNA的分离与纯化等一系列烦琐的步骤。还可以从纳克(ng)量级的起始样本扩增得到微克级的DNA，具有步骤简单、省时、高效、低成本等优点。 | ||
| 搜索关键词： | phi29dna 聚合 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种phi29DNA聚合酶的制备方法，包括以下步骤：1)合成phi29DNA聚合酶的基因的上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；2)通过PCR扩增，得到PCR产物，再将PCR产物和表达载体通过双酶切，再将酶切后的PCR产物和表达载体连接通过双酶切后与双酶切后表达载体连接，转化大肠杆菌，测序，筛选出阳性表达重组质粒；3)将阳性表达重组质粒转化到宿主菌中，添加诱导剂诱导培养，以获得表达菌株；4)最后将获得的表达菌株进行纯化，得到phi29DNA聚合酶。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于吴江近岸蛋白质科技有限公司，未经吴江近岸蛋白质科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610647512.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
