[发明专利]一种多重测序文库的构建方法

摘要

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种ITS序列多重测序文库的构建方法。所述的构建方法包括以下步骤：(1)、扩增PCR：使用引物F1和引物R1构成引物对，PCR扩增样品中的ITS1‑ITS4序列；(2)、建库PCR：使用引物F2和引物R2构成引物对，以步骤(1)获得的PCR产物为模板，进行PCR扩增。本发明提供的构建方法中所使用的40个Index，测序反应得到的数据质量和平衡性更好，测序结果更加准确；能够实现对多达15*15*10个不同文库样品的标记；不仅能够对动物肠道、水体以及大曲等复杂性相对较低的样品类型获得高特异的扩增产物；对土壤和淤泥等高复杂性的样品类型也具有较高的特异性。

主权项

1.一种ITS序列多重测序文库的构建方法，其特征在于：所述的构建方法包括以下步骤：(1)、扩增PCR：使用引物F1和引物R1构成引物对，PCR扩增样品中的ITS1‑ITS4序列；(2)、建库PCR：使用引物F2和引物R2构成引物对，以步骤(1)获得的PCR产物为模板，进行PCR扩增；所述的构建方法中，引物F1是含有以下Index1‑30中的任意一个Index的ITS1序列的5’端扩增引物：所述的ITS1序列的5’端扩增引物的序列为SEQ ID NO：1‑9所示的核苷酸序列中的任意一条序列，其中Index位于ITS1序列的5’端扩增引物的核苷酸序列中的第28和29个核苷酸之间；所述的引物R1是含有以下Index1‑30中的任意一个Index的ITS4序列的3’端扩增引物；所述的ITS4序列的3’端扩增引物的序列为SEQ ID NO：10‑19中所示的任意一条核苷酸序列，其中Index位于ITS4序列的3’端扩增引物的核苷酸序列中的第29和30个核苷酸之间；所述的引物R2是在SEQ ID NO：20所示的核苷酸序列中包含了以下Index31‑40中的任意一个Index所构成的核苷酸序列，其中Index位于SEQ ID NO：20所示的核苷酸序列中的第24和25个核苷酸之间；所述的引物F2的序列为SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列；所述的引物F1、引物R1和引物R2中包含的Index的序列为不同核苷酸序列。