[发明专利]一种检测纳米材料细胞毒性的方法在审
| 申请号： | 201610535859.1 | 申请日： | 2016-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN106047980A | 公开（公告）日： | 2016-10-26 |
| 发明（设计）人： | 刘士德;何志昂;张建华 | 申请（专利权）人： | 何志昂 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518000 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及纳米材料安全性检测的领域，公开了一种检测纳米材料细胞毒性的方法，包括以下步骤，构建COX4‑PEGFP‑N2质粒，将COX4‑PEGFP‑N2质粒的转染Hela细胞并筛选出稳定遗传的细胞株，用纳米材料处理细胞后通过荧光显微镜观察线粒体的形态与荧光强度来评价纳米材料的细胞毒性。本发明以图像直观衡量纳米材料的细胞毒性，检测灵敏，重复性高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 纳米 材料 细胞 毒性 方法 | ||
【主权项】：
一种检测纳米材料细胞毒性的方法，其特征在于：包括如下步骤1）COX4‑PEGFP‑N2质粒的构建（a）提取Hela细胞的RNA，并将其进行反转录操作，用合适的引物通过PCR扩增目的基因COX4并使其带有内切酶的黏性末端；（b）酶切PEGFP‑N2质粒与目的基因COX4，并将酶切产物纯化后进行酶连，得到重组质粒COX4‑PEGFP‑N2；（c）将重组质粒COX4‑PEGFP‑N2用大肠杆菌DH‑5α进行扩增，并通过基因测序鉴定重组质粒；2）COX4‑PEGFP‑N2质粒的转染与筛选将重组质粒COX4‑PEGFP‑N2转染Hela细胞，并通过G418筛选稳定生长的Hela细胞株，筛选的Hela细胞株通过荧光显微镜观察验证其荧光稳定性；3）纳米材料细胞毒性的检测将筛选的Hela细胞株培养于孔板中，第二天向孔板中加入纳米材料继续细胞培养，第三天通过荧光显微镜观察线粒体的形态与荧光强度来评价纳米材料的细胞毒性。
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