[发明专利]用解淀粉芽孢杆菌GUHP86提高猪血蛋白水解度的方法

摘要

用解淀粉芽孢杆菌GUHP86提高猪血蛋白水解度的方法，包括以下步骤：⑴制备菌种培养基；⑵制备发酵菌种液：⑶选取发酵培养基；⑷制备发酵液；⑸催化水解猪血蛋白。解淀粉芽孢杆菌GUHP86已于2016年1月5日保藏于武汉中国典型培养物保藏中心，该中心地址是:中国武汉·武汉大学，保藏编号为CCTCC NO.M2016003。本发明是一种优化的液态发酵培养方法，比固态发酵具有以下优点:液态发酵菌种与底物便于混合均匀，充分接触，缩短发酵时间，提高水解效率。可高效催化水解猪血蛋白，使其在最优培养条件下，水解度达到最大。适用于解淀粉芽孢杆菌GUHP86液态发酵猪血培养。

主权项

1.用解淀粉芽孢杆菌GUHP86提高猪血蛋白水解度的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)制备菌种培养基按照以下物料配方制备菌种培养基:猪血粉15.0g，NaCl5.0g，MgSO₄·7H₂O0.2g，CaCl₂0.1 g，K₂HPO₄5.0g，pH7.0，蒸馏水1000mL，于121℃下灭菌20min，得到菌种培养基，备用；(2)制备发酵菌种液:在250mL三角瓶内，挑取2环初筛斜面将解淀粉芽孢杆菌GUHP86接入菌种培养基，装液量50mL，于30℃下以转速为180r/min摇床培养24h，即得发酵菌种液，备用；(3)选取发酵培养基选用新鲜猪血作为发酵培养基；(4)制备发酵液将发酵菌种液按6％的接种量接种于发酵培养基中，在30℃下以转速为180r/min的摇床培养48h，然后在4℃下以转速为10000r/min的离心分离机离心10min，得到的发酵上清液即为发酵液；(5)催化水解猪血蛋白将上述发酵液与新鲜猪血混合发酵，进行催化水解猪血蛋白；(6)催化水解猪血蛋白条件确定1)单因素试验设计以不同的温度、时间、接种量及摇床转速分别考察解淀芽孢杆菌GUHP86水解猪血的条件，在单因素的基础上，再对解淀粉芽孢杆菌GUHP86进行响应面优化实验确定最佳的水解条件，每个实验重复3次；以猪血蛋白水解度为指标确定菌株水解猪血的作用条件范围；2)Box‑Benhnken试验在上述单因素实验的基础上设计Box‑Benhnken试验，优化解淀粉芽孢杆菌GUHP86对猪血蛋白的培养条件；选取温度、发酵时间、接种量及转速进行响应面优化，建立了猪血蛋白水解度的数学模型并对模型求最优解，获得了最佳水解条件，即发酵液的温度为35℃、接种量为7％、发酵时间为60h、摇床转速为179.6r/min时，响应值水解度达到最大值为28.23％,与优化前相比提高了0.42倍；发酵后猪血无血腥味，有发酵所特有的香味；所述解淀粉芽孢杆菌GUHP86己于2016年1月5日保藏于武汉中国典型培养物保藏中心，该中心地址是：中国武汉·武汉大学，邮政编码为430072；简称解淀粉芽孢杆菌GUHP86，保藏编号为CCTCC NO.M 2016003，该菌株系从中国贵州贵阳生猪屠宰的屠宰场周围土壤样本中分离得到。