[发明专利]一种辣椒抗病基因鉴定方法

摘要

本发明公开了一种辣椒抗疫病基因鉴定方法，包括以下步骤S1供试抗疫病辣椒品种的筛选与育苗；S2带有荧光标记毒素疫菌的准备；S3采取辣椒壮苗叶片，用带有荧光标记毒素的疫菌进行全叶离体接种；S4对接种后含有荧光标记毒素的不同品种辣椒叶片提取DNA并进行测序，同时通过关联分析法确立辣椒抗疫病荧光标记毒素鉴定与辣椒抗疫病基因片段之间对应关系，将辣椒DNA片段建成辣椒抗疫病基因数据库；S5将待检测辣椒DNA序列与上述辣椒抗病基因数据库进行Blast比对分析，即可得知待检辣椒品种是否含有抗疫病基因即是否具有抗疫病性能。本发明建立的一种辣椒抗疫病基因鉴定方法，鉴定结果准确可靠直观，操作简便，鉴定所需时间短，人力物力耗费少，对环境生态友好。

主权项

一种辣椒抗疫病基因鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：供试抗疫病辣椒品种和幼苗的准备，搜集来源于不同产地抗疫病的20个辣椒品种种子，每品种取辣椒种子100粒，将其播种于育苗钵基质中，然后放置于温室中进行育苗（20～30℃），待生长至3～4片幼叶时，将其移栽至营养盆中继续进行培养，待再生长至7～8片叶时即获得辣椒壮苗材料；S2：供试疫病菌株的收集和荧光素标记毒素的制备，辣椒疫病菌株由淮安市农科院辣椒课题组馈赠，将荧光素与所述疫病菌株在培养皿中共浸染40min，然后于25℃光照培养5～6 d后即获得含有荧光标记毒素作接种用的疫病菌株；S3：用带荧光标记毒素的疫菌离体接种辣椒叶片，从培育的20个品种辣椒幼苗中，每个品种选取10株壮苗，取叶片，采用离体叶片全叶接种法接种含有荧光标记毒素的疫菌（浸菌处理24h），PBS漂洗残留菌液，然后将接种后的辣椒叶片在培养基上培养10d，每品种幼苗设置3个重复实验组；S4：辣椒抗疫病基因数据库的构建，取上述离体接种并培养10d后的每个供试辣椒品种幼叶，用试剂盒提取辣椒叶片DNA，琼脂糖凝胶电泳进行质量检测，然后委托有关公司进行DNA测序，同时根据上述辣椒品种在荧光显微镜下抗疫菌毒素荧光标记与辣椒抗疫病表现型鉴定结果，通过表型与基因关联分析法确立辣椒抗疫病毒素荧光标记鉴定与辣椒抗疫病基因之间对应关系，将荧光显示抗疫病辣椒品种中所获得的抗疫病相关基因片段登记入Genbank数据库上，从而建成辣椒抗疫病基因数据库；S5：待检辣椒抗疫病基因的鉴定，提取待检测辣椒植株叶片DNA并委托公司进行测序，然后与S4步骤中建立的辣椒抗疫病基因数据库，在Genbank上通过Blast软件进行DNA序列比对分析，若出现匹配片段，则表明待检辣椒植株含有抗疫病基因即为抗疫病辣椒品种，该鉴定结果准确可靠，简便直观，灵敏快捷。