[发明专利]一种幽门螺杆菌基因无痕敲除的方法在审
| 申请号： | 201610458378.5 | 申请日： | 2016-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN106086054A | 公开（公告）日： | 2016-11-09 |
| 发明（设计）人： | 季晓飞;赵慧琳;李波清;张莹;王颖 | 申请（专利权）人： | 滨州医学院 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74 |
| 代理公司： | 烟台智宇知识产权事务所(特殊普通合伙) 37230 | 代理人： | 王雪梅 |
| 地址： | 264003 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及微生物基因工程领域中的基因敲除技术，特别涉及一种幽门螺杆菌基因无痕敲除的方法，（a）构建适用于幽门螺杆菌的敲除模板质粒和辅助质粒；（b）设计目的基因同源重组双交换同源臂，在敲除模板质粒基础上构建目的基因敲除质粒，转入幽门螺杆菌中得到基因敲除突变株；（c）将辅助质粒转入上步骤得到的基因敲除突变株中，去除抗性基因，得到携带辅助质粒的无痕基因敲除突变株；（d）辅助质粒通过无抗生素传代培养消除，最终获得无痕基因敲除突变株。本发明，实现了幽门螺杆菌中无痕基因敲除突变株的构建，相比普通的基因敲除，该方法在实现目的基因敲除的同时不引入外源基因，使对目的基因的功能分析更为准确。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 幽门 螺杆 基因 无痕敲 方法 | ||
【主权项】：
一种幽门螺杆菌基因无痕敲除的方法，包括以下步骤：（a）构建适用于幽门螺杆菌的带有FRT位点的卡那霉素抗性敲除模板质粒和表达FLP重组酶的氯霉素抗性辅助质粒；（b）设计目的基因同源重组双交换同源臂，在敲除模板质粒基础上构建目的基因敲除质粒，转入幽门螺杆菌中得到带有FRT位点和卡那霉素抗性的基因敲除突变株；（c）将表达FLP重组酶的氯霉素抗性辅助质粒转入上步骤得到的基因敲除突变株中，去除FRT位点之间的卡那霉素抗性基因，得到携带辅助质粒的无痕基因敲除突变株；（d）辅助质粒通过无抗生素传代培养消除，最终获得无痕基因敲除突变株。
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