[发明专利]一种沉默分泌型丛生蛋白抑制肝癌裸鼠移植瘤能力的方法

摘要

本发明公开了一种沉默分泌型丛生蛋白抑制肝癌裸鼠移植瘤能力的方法，包括干预和检测两个步骤。本发明的优点在于：本发明的方法简单高效，明确的表明了沉默分泌型丛生蛋白可明显抑制人肝癌细胞裸鼠皮下成瘤能力；本发明有效表明了沉默分泌型丛生蛋白转录延长人肝癌细胞荷瘤裸鼠模型潜伏期；本发明有效表明了沉默分泌型丛生蛋白延缓肝癌裸鼠移植瘤生长速度；本发明通过蛋白及基因分析，有效表明了沉默分泌型丛生蛋白使肝癌裸鼠移植瘤中分泌型丛生蛋白及其mRNA表达水平低于空白对照组及阴性对照组。

主权项

一种沉默分泌型丛生蛋白抑制肝癌裸鼠移植瘤能力的方法，其特征在于：包括干预和检测两个步骤；所述干预具体步骤为：（1）针对人分泌型丛生蛋白序列NCBI: NM_001831.3设计干扰序列: sCLU‑shRNA，5’‑GTAAGTACGTCAATAAGGA‑3’，阴性对照序列NC‑shRNA, 5’‑TTCTCCGAACGTGTCACGT‑3’，并构建质粒载体pRNAT‑U6.1/Neo‑ shRNA1，同时设立空白对照组；（2）将上述重组质粒转染至人肝癌HepG2细胞，并使用遗传霉素进行处理，筛选得到稳定转染的HepG2细胞；（3）将上述稳定转染的HepG2细胞接种裸鼠皮下构建人肝癌细胞移植瘤模型；（4）测定稳定转染的HepG2细胞在裸鼠皮下成瘤情况及瘤内分泌型丛生蛋白mRNA及蛋白表达情况；所述检测包括RT‑PCR对移植瘤内sCLU‑mRNA水平的检测、聚氰基丙烯酸正丁酯测定法对移植瘤内总蛋白水平的检测、酶联免疫吸附测定法对移植瘤内sCLU蛋白水平的检测和HE染色及免疫组化分析。