[发明专利]生产5‑氨基乙酰丙酸的谷氨酸棒杆菌菌株及构建及应用在审
| 申请号： | 201610408674.4 | 申请日： | 2016-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN106047916A | 公开（公告）日： | 2016-10-26 |
| 发明（设计）人： | 王智文;冯丽丽;陈涛;赵学明 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/77 | 分类号： | C12N15/77;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/15 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了生产5‑氨基乙酰丙酸的谷氨酸棒杆菌菌株及构建及应用，构建方法为：(1)在谷氨酸棒杆菌中敲除乳酸脱氢酶编码基因ldhA和乙酸生成基因pta‑ackA、pqo和cat，得到的菌株命名为CB4；在CB4菌株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶编码基因ppc前面插入强的sod启动子，得到菌株CB5；在CB5菌株中敲除基因pck，得到菌株CB6；(2)将质粒pXA和质粒pEP2tuf‑rhtA转入到CB6菌株中。本发明构建的菌株在以10g/L葡萄糖为碳源的培养基中能够生产2.78g/L 5‑氨基乙酰丙酸，这为后续发酵罐连续补料提高5‑氨基乙酰丙酸的产量和产率奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 生产 氨基 乙酰 丙酸 谷氨酸 杆菌 菌株 构建 应用 | ||
【主权项】：
一种生产5‑氨基乙酰丙酸的谷氨酸棒杆菌菌株的构建方法，其特征是包括如下步骤：(1)在谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)ATCC 13032中敲除乳酸脱氢酶编码基因ldhA和乙酸生成基因pta‑ackA、pqo和cat，得到的菌株命名为CB4；在CB4菌株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶编码基因ppc前面插入强的sod启动子，得到菌株CB5；在CB5菌株中敲除磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶编码基因pck，得到菌株CB6；(2)将构建好的过表达5‑氨基乙酰丙酸合酶基因的质粒pXA和过表达RhtA运输蛋白的质粒pEP2tuf‑rhtA转入到CB6菌株中，获得生产5‑氨基乙酰丙酸的谷氨酸棒杆菌菌株AL2。
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