[发明专利]一种二倍体草莓的转基因培养基及其转基因方法有效
| 申请号： | 201610392195.8 | 申请日： | 2016-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN106047921B | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 王媛花;颜志明;贾思振;蔡善亚 | 申请（专利权）人： | 江苏农林职业技术学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/74 |
| 代理公司： | 32204 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) | 代理人： | 许丹丹<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 212400 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种二倍体草莓的转基因培养基及其转基因方法，该转基因培养基包括：二倍体草莓种子培养基S1、二倍体草莓共培养培养基S2、二倍体草莓筛选培养基S3；该转基因方法包括：(1)菌种活化，(2)二倍体草莓转基因；本发明建立了一个高效、快速、稳定二倍体草莓转化体系，外植体采用叶片和叶柄，将材料最大程度的应用，提高了提高二倍体草莓转基因转化效率，转化率可达到50％以上；并且能够解决传统农杆菌介导法中的步骤繁杂，容易污染的问题，为进一步应用遗传转化方法改良草莓品种提供实践基础，有利于今后草莓分子育种工作的发展，本发明转基因方法操作过程简单，转化效率高，试验周期短，耗费人力物力较小。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 二倍体 草莓 转基因 培养基 及其 方法 | ||
【主权项】：
1.一种二倍体草莓的转基因培养基的转基因方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）菌种活化：/n将含质粒pK7WG2D农杆菌EHA105在LB固体培养基上划线，25-30 ℃培养1-3天；/n挑取平板上长的好的单菌落2-3个，接种到50 mL LB液体培养基中，25-30 ℃，200-250rpm 在摇床中振荡培养至OD600值0.3-0.5；/n常温下，4000-6000rmp离心7-9 分钟，去掉上清液，在无菌滤纸上倒扣离心管，将上清液去除，重悬菌体，在摇床中振荡培养，测定OD600值为0.1-0.3，制得活化好的菌液；/n（2）二倍体草莓转基因/n材料处理：二倍体草莓种子种植于S1培养基上，长出叶片后在无菌条件下将叶片完全剪下，用手术刀延叶脉横切；同时将草莓叶柄切成0.5-1.5厘米长段，在叶柄上面用手术刀刻伤；/n侵染：将切好的叶片和刻伤的叶柄直接放入活化好的菌液侵染，过程中轻微摇匀，浸染30-40 分钟；侵染完成后将叶片和叶柄取出，直接放置于共培养培养基S2上，使叶片和叶柄伤口与培养基充分接触，在培养室中23-27 ℃，暗培养2-4天，将叶片叶柄转入筛选培养基S3上培养18-22天，二倍体草莓叶片边缘会有白色愈伤组织长出，此时在体式荧光显微镜下进行观察，一部分愈伤有非常亮的绿光发出，一部分没有发光；将发绿光的抗性愈伤保留下来，经过35-45天的培养以后，分化出抗性植株；此时再进行一次荧光检测，将整个抗性植株叶片和叶柄都发绿光的保留下来，发红光的去除掉；抗性植株生长55-65天再进行一次荧光检测，荧光检测中抗性苗的叶片，叶柄以及根都发亮绿光的可以确定为转基因植株；/n二倍体草莓种子培养基S1：2.0-2.5g/L MS、15-25g/L蔗糖、0.2-0.5mg/L 6-BA、0.0.5-0.15mg/L NAA、5.0-6.0 g/L琼脂粉，pH5.5-6.0；/n二倍体草莓共培养培养基S2：4.2-4.6 g/LMS、25-35g/L蔗糖、0.2-0.4mg/L ZT、0.4-0.6mg/L TDZ、0.05-0.15mg/L IBA、5.0-6.0 g/L琼脂粉，pH5.5-6.0；/n二倍体草莓筛选培养基S3：4.2-4.6 g/L MS、25-35g/L蔗糖、0.2-0.4mg/L ZT、 0.4-0.6mg/L TDZ、0.05-0.15mg/L IBA、 5.0-6.0 g/L琼脂粉、10-30mg/L卡那霉素、300-500mg/L羧苄青霉素、pH5.5-6.0。/n
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- 在此披露了一种新颖的被命名为5307的转基因玉米转殖项。本发明涉及被插入到玉米基因组中的重组构建体的DNA序列以及位于导致该5307转殖项的插入位点侧翼的基因组序列的DNA序列。本发明进一步涉及用于检测5307的DNA序列的存在的测定法，涉及包含5307的基因型的玉米植物以及玉米种子，并且涉及通过将包含该5307基因型的玉米植物与自身或另一种玉米品种进行杂交用来产生玉米植物的方法。
- 杀虫蛋白的用途-201610889095.6
- 丁德荣;张爱红 - 北京大北农科技集团股份有限公司;北京大北农生物技术有限公司
- 2016-10-12 - 2020-01-10 - C12N15/82
- 本发明涉及一种杀虫蛋白的用途，所述控制劳氏黏虫害虫的方法包括：将劳氏黏虫害虫至少与Cry1A蛋白接触。本发明通过植物体内产生能够杀死劳氏黏虫的Cry1A蛋白来控制劳氏黏虫害虫；与现有技术使用的农业防治方法、化学防治方法和物理防治方法相比，本发明对植物进行全生育期、全植株的保护以防治劳氏黏虫害虫的侵害，且无污染、无残留，效果稳定、彻底，简单、方便、经济。
- AtPrx64基因在铝胁迫下提高植物硝态氮吸收中的应用-201610383899.9
- 李昆志;刘文霞;杨志丽;张恒丽;徐慧妮;陈丽梅;吴远双 - 昆明理工大学
- 2016-06-02 - 2020-01-10 - C12N15/82
- 本发明公开了
- 具有提高的光呼吸效率的植物-201880029875.0
- 唐纳德·R·奥尔特;保罗·F·索思;伯克利·沃克 - 由农业部部长代表的美利坚合众国
- 2018-03-07 - 2020-01-10 - C12N15/82
- 本文提供的是具有改变的光呼吸特性的植物。破坏涉及穿梭乙醇酸和/或甘油酸的转运蛋白导致光合作用速率降低，植物生长降低以及基因表达和光合作用代谢产物谱改变。此类破坏还与引入的表达可供选择的光呼吸酶途径的组件的基因组合，以提高光合作用效率。
- 一种耐干旱玉米的遗传转化方法-201910901695.3
- 顾勇 - 四川育良生物科技有限公司
- 2019-09-23 - 2020-01-07 - C12N15/82
- 本发明公开了一种耐干旱玉米的遗传转化方法，包括如下步骤：S1.耐干旱基因或耐干旱诱导基因的选择与培养；S2.测量成熟玉米种子的生理吸胀曲线，吸胀阶段用含有S1中的耐干旱基因或耐干旱诱导基因的菌液浸泡；S3.筛选出S2中玉米种子不发生损伤的最大吸胀种子；S4.对S3中筛选出的玉米种子用发根农杆菌震荡侵染19.5‑20小时至种子发芽；S5.选取发了芽的苗子，清除其上发根农杆菌，并对该苗子用酒精消毒后，转入培养基进行培养，同时在高温光照下培养5‑7d，获得耐干旱玉米植株；S6.对S5中获得植株进行分子检测。采用本发明能产出高产率的耐干旱玉米，且玉米抗旱效果好。
- 专利分类
